[發明專利]人類乳頭瘤病毒空衣殼粒子的制備方法及其產品

有效

• 申請號: 201110258298.2
• 申請日: 2011-09-02
• 公開（公告）號: CN102321635A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 張志芳;李軼女;邊大勇;易詠竹;楊標;王國增;沈桂芳;舒惠國
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/37
• 分類號: C12N15/37;C12N15/62;C12N15/866;C12N7/04;C12N7/01;A61K39/12;A61P31/20;A61P35/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京市德權律師事務所 11302
• 代理人: 余光軍

1.一種人類乳頭瘤病毒空衣殼粒子的制備方法，包括：（1）將人類乳頭瘤病毒空衣殼粒子的主要衣殼蛋白基因或人類乳頭瘤病毒空衣殼粒子的主要衣殼蛋白基因和次要衣殼蛋白基因聯合表達的組合轉移到桿狀病毒的基因組上，構建得到重組桿狀病毒；（2）用所構建的重組桿狀病毒感染昆蟲宿主或昆蟲細胞；（3）培養被感染的昆蟲宿主或昆蟲細胞，收獲并純化所表達的抗原。

2.按照權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述的人類乳頭瘤病毒空衣殼粒子的主要衣殼蛋白基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO:1或?SEQ?ID?NO:5所示；

?????所述的人類乳頭瘤病毒空衣殼粒子的主要衣殼蛋白基因和次要衣殼蛋白基因聯合表達的組合由SEQ?ID?NO:1所示的人乳頭瘤病毒16型主要衣殼蛋白基因L1和SEQ?ID?NO:3所示的人乳頭瘤病毒16型次要衣殼蛋白基因L2所組成的聯合表達的組合；優選的，通過SEQ?ID?NO:13所示的IRES核苷酸序列將人乳頭瘤病毒16型的主要衣殼蛋白基因L1和次要衣殼蛋白基因L2連接得到核苷酸序列為SEQ?ID?NO:9所示的聯合表達的組合；

?????所述的人類乳頭瘤病毒空衣殼粒子的主要衣殼蛋白基因和次要衣殼蛋白基因聯合表達的組合還可以是由SEQ?ID?NO:5所示的人乳頭瘤病毒18型主要衣殼蛋白基因L1和SEQ?ID?NO:7所示的人乳頭瘤病毒18型次要衣殼蛋白基因L2所組成的聯合表達的組合；優選的，通過SEQ?ID?NO:13所示的IRES核苷酸序列將SEQ?ID?NO:5所示的人乳頭瘤病毒18型的主要衣殼蛋白基因L1和SEQ?ID?NO:7所示的人乳頭瘤病毒18型的次要衣殼蛋白基因L2連接得到核苷酸序列為SEQ?ID?NO:11所示的聯合表達的組合。

3.按照權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（1）中所述的重組桿狀病毒按照以下方法構建得到：（a）將人類乳頭瘤病毒空衣殼粒子的主要衣殼蛋白基因或人類乳頭瘤病毒空衣殼粒子的主要衣殼蛋白基因和次要衣殼蛋白基因聯合表達的組合克隆到桿狀病毒運載載體中構建得到轉移表達載體；（b）將所構建的轉移表達載體與桿狀病毒DNA進行共轉染，得到重組桿狀病毒。

4.按照權利要求1或3所述的制備方法，其特征在于：所述的重組桿狀病毒的微生物保藏號是CGMCC?No.5126或CGMCC?No.5127。

5.按照權利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述的桿狀病毒運載載體的表達盒為由多角體蛋白啟動子、p10啟動子或ie-1啟動子中的任意一種與增強子所組合成的表達盒。

6.?按照權利要求3所述的制備方法，其特征在于：例如，所述的桿狀病毒運載載體選自pBM034,?pBM93,?AcRP23-lacZ,?AcRP6-SC,?AcUWl-lacZ,?BacPAK6,?Bac?to?Pac,?Bacmid,?BlucBacII(pETL),?p2Bac,?p2Blue,?p89B310,?pAc360，pAc373,?pAcAB3，pAcAB?4，PAcAS3,?pAcC129，pAcC4，DZI,?pAcGP67,?pAcIEl,?pAcJPl,?pAcMLF2，pAcMLF7，pAcMLF8,?pAcMPl，pAcMP2,?pAcRP23，pAcRP25,?pAcRW4,?pAcsMAG，?pAcUWl，pAcUW21，pAcUW2A，pAcUW2B，pAcUW3，pAcUW31，pAcUW41，pAcUW42，pAcUW43，pAcUW51,?pAcVC2，pAcVC3，pAcYMl，?pAcJcC5，?pBacl，pBac2，?pBlueBacIII，?pBlueBacHis，?pEV55，mXIV，pIEINeo，?pJVETL，?pJVNhel，?pJVP10，pJVrsMAG，?pMBac，?pP10，?pPAKl，?pPBac，pSHONEX?1.1,?pSYN?XIV?VI+,?pSYNVI+wp，pSYNXIV?VI-，pVL1391，pVL?1392，pVL?1393，pVL941，pVL?945，pVL?985,?pVTBac,?pBM030或pUAC-5；

??????所述的桿狀病毒選自BmNPV、AcMNPV、ApNPV、、HaNPV、HzNPV、LdMNPV、MbMNPV、OpMNPV、SlMNPV、SeMNPV或SpltNPV。