[發(fā)明專利]太平洋鱈魚精子保存冷凍劑及太平洋鱈魚精子保存方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110258042.1 | 申請日： | 2011-09-02 |
| 公開（公告）號： | CN102258007A | 公開（公告）日： | 2011-11-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王偉;姜志強(qiáng);王華;李君豐 | 申請（專利權(quán)）人： | 大連海洋大學(xué) |
| 主分類號： | A01N1/02 | 分類號： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 大連非凡專利事務(wù)所 21220 | 代理人： | 田和穗 |
| 地址： | 116000 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 太平洋 鱈魚 精子 保存 冷凍劑 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種太平洋鱈魚精子保存的冷凍劑，以及利用這種冷凍劑來保存太平洋鱈魚精子的方法。
背景技術(shù)
在人工養(yǎng)殖魚類的過程中，往往會(huì)遇到雌雄親魚性成熟不同步、雄性親魚少、精液量不足等問題，影響了魚類養(yǎng)殖的效率和產(chǎn)量。而魚類精液保存技術(shù)則能夠解決這個(gè)問題。現(xiàn)有的魚類精液保存方法主要有常溫，低溫（0至4攝氏度）兩種。其中常溫保存具有方便、簡單等特點(diǎn)，但是保存的時(shí)間非常短，無法解決雌雄親魚性成熟不同步的問題。而低溫的保存時(shí)間雖然較常溫保存的時(shí)間要長，但在低溫保存的過程中，滲透壓、pH值等諸多理化因子都會(huì)影響最后的保存效果，同時(shí)這種方法也無法進(jìn)行長期保存。因此現(xiàn)在需要一種能夠解決上述問題的新型魚類精子保存冷凍劑以及保存方法。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述不足，提出一種能夠長期保存太平洋鱈魚精子，并能保證解凍后精子活力仍能夠達(dá)到80%以上的太平洋鱈魚精子保存冷凍劑，以及利用這種冷凍劑來保存太平洋鱈魚鏡子的方法。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：一種太平洋鱈魚精子保存冷凍劑，其特征在于：所述的冷凍劑由冷凍稀釋液和抗凍劑按照9:1（體積比）的比例混合而成，其中冷凍稀釋液的組分含量為：
NaCl：????42-48mM，
KHCO3：?2.5-3.5mM，
CaCl2：???2.5-3.5mM，
葡萄糖：??35-45mM，
Tris：??????1.5-2.5mM，
谷胱甘肽：1.5-2.5mM，
牛血清蛋白：1.5-2.5g/L，
所述的冷凍稀釋液的pH值范圍是：6.7-6.9；
所述的冷凍劑中的抗凍劑為二甲亞砜（DMSO）。
將冷凍劑與太平洋鱈魚精液按照1:2（體積比）的比例均勻混合，在3至5℃的環(huán)境下平衡25至35分鐘，在零下25至零下15℃的環(huán)境下平衡8至12分鐘，在負(fù)零下30至零下110℃的環(huán)境下平衡4至6分鐘，最后放入液氮中冷凍保存。
本發(fā)明同現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)：
本種鱈魚精子保存冷凍劑，以及利用這種冷凍劑對鱈魚精子的保存方法，能夠?qū)ⅦL魚精子在超低溫環(huán)境下（零下196攝氏度）進(jìn)行長期保存，不僅保存時(shí)間長，能夠解決雌雄親魚性成熟不同步的問題，而且還能夠保證解凍后的鱈魚精子活力較好（活力達(dá)到80以上），并且這種冷凍劑便于配置，保存方法簡便、容易，十分適合于在鱈魚養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中推廣應(yīng)用，其市場前景和科研前景較為廣闊。
具體實(shí)施方式
下面是本發(fā)明的具體實(shí)施方式。
一種太平洋鱈魚精子保存冷凍劑，其特征在于：所述的冷凍劑由冷凍稀釋液和抗凍劑兩部分組成，其中冷凍稀釋液的組分含量為：
NaCl：42-48mM，以45mM為最佳值；KHCO3：2.5-3.5mM，以3mM為最佳值；CaCl2：2.5-3.5mM，以3mM為最佳值；葡萄糖：35-45mM，以40mM為最佳值；Tris：1.5-2.5mM，以2mM為最佳值；谷胱甘肽：1.5-2.5mM，以2mM為最佳值；牛血清蛋白：1.5-2.5g/L，以2g/L為最佳值；
??????將上述的原料充分均勻混合后，利用0.1M的HCl調(diào)節(jié)混合物的pH值，將其PH值調(diào)整至6.7-6.9，以6.8為最佳（經(jīng)過上述處理后的冷凍稀釋液的滲透壓為150-155mosM/kg）。
冷凍稀釋液配置完成，放置在4℃的環(huán)境下保存。
當(dāng)需要對太平洋鱈魚的精子進(jìn)行長期保存時(shí)，取配置好的冷凍稀釋液，將其與抗凍劑二甲亞砜（DMSO）按照9:1（體積比）的比例進(jìn)行混合，制備成冷凍劑，并將太平洋鱈魚的精液與冷凍劑按照1:2（體積比）的比例進(jìn)行混合；并將混合劑放入凍存管中；
混合均勻后，在4℃的環(huán)境下平衡30分鐘；
然后在零下20℃的環(huán)境下平衡10分鐘；
然后在零下110℃的環(huán)境下平衡5分鐘，最后直接將凍存管放入液氮中（負(fù)196℃）進(jìn)行冷凍保存。
當(dāng)需要對超低溫保存的太平洋鱈魚精液解凍時(shí)，首先將盛有精液的凍存管從液氮中取出，在零下50℃的環(huán)境下平衡3-5分鐘，然后將凍存管在37℃的條件下進(jìn)行水浴，實(shí)現(xiàn)快速解凍；解凍后用砂濾海水（pH8.0，鹽度31）對鱈魚精子進(jìn)行激活即可。
利用這種冷凍劑和保存方法超低溫保存的鱈魚精子，在激活后其精子活力可達(dá)到80%以上。
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