[發明專利]雌二醇(E2)定量測定試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201110257932.0
• 申請日: 2011-08-31
• 公開（公告）號: CN102426253A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 內蒙古科慧生物科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 北京富天民宏濟知識產權代理事務所(普通合伙) 11272
• 代理人: 劉壽椿;龔雅民

技術領域

本發明涉及測定血清的試劑盒及其測試方法，尤其是涉及測定血清中雌二醇(E2)含量的試劑盒及其測試方法。

背景技術

雌二醇(E2)是一種含芳香化A環的18碳類固醇激素，分子量為272.4道爾頓。雌二醇是女性雌激素中生物活性最強的一種甾體激素，主要來源于卵巢、黃體和胎盤，少量由腎上腺分泌。男性主要由睪丸產生。血循環中98％的雌二醇與性激素結合球蛋白(SHBG)結合，少量與白蛋白結合，只有極少量呈游離態的雌二醇具有生理活性。雌二醇的作用是通過與相應的核受體結合，在細胞核水平觸發相應的調節反應。其生理效應主要是促使女性生殖器官的生長發育、促使第二性征的發育、對下丘腦-垂體軸的影響等。并對女性月經維持、產卵、排卵、受精、妊娠起著重要作用。男性體內也有少量雌二醇，如果雌激素與睪酮比例失調，男性會出現一些特定的癥狀，例如腹型肥胖、乳房發育、性欲下降和雄激素低下所引發的其他一些癥狀。一些治療藥物、慢性酒精中毒和一些長期處于亞健康狀態的情況也常會導致雌二醇水平升高。臨床上雌二醇水平常用于評價卵巢功能，也可用于診斷女性性早熟和男子女性化乳房發育。對于臨床常見的無月經情況，如更年期、懷孕或其他疾病所致的閉經，雌二醇也是很重要的檢查之一。在輔助生殖技術中，連續檢測雌二醇用于體外受精前確定卵泡生長情況。此外，還用于監測更年期激素替代治療。在孕期篩查方面，雌二醇與母體AFP、hCG和抑制素A共同用于監測胎兒畸形的一些疾病，如唐氏綜合征。從檢測角度上來說，目前臨床上用于測定E2的方法主要有放免法、ELISA法、化學發光法等。

過去以放免為代表的雌二醇(E2)測定試劑盒受方法學的限制，其靈敏度和抗干擾能力嚴重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市場，目前應用較多的為酶聯免疫檢測技術和化學發光技術。化學發光技術興起于上個世紀80年代是繼酶聯免疫技術和放免技術之后發展起來的新興技術，由于其高靈敏度、高特異性，同時方法簡便、快速，標記結合物穩定，無放射性同位素損傷和污染等特點，在近些年得到了飛速發展。

磁微粒分離酶聯免疫檢測技術是一種以磁性微粒為固相分離載體，將免疫磁微粒分離技術與酶聯免疫檢測技術相結合而建立的一種新型免疫檢測方法。傳統ELISA方法，抗原、抗體的結合反應是在固相(ELISA板反應孔)表面進行的，而磁微粒分離酶聯免疫檢測方法，抗原、抗體的結合反應也在近似液相的條件下進行，因而反應快速、徹底。與傳統ELISA相比具有靈敏度高，檢測用時少的優點。

發明內容

本發明需要解決的技術問題在于提供一種雌二醇(E2)定量測定試劑盒及其檢測方法，采用該試劑盒進行E2檢測具有較高的靈敏度和特異性，和更短的獲得檢測結果的時間和更簡便的操作方式。

本發明提供了一種雌二醇(E2)的定量測定試劑盒，其包含的試劑有E2磁分離試劑，酶反應物，反應增強劑，稀釋液，校準品、質控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。

所述的磁分離試劑含有標記有抗E2單克隆抗體的磁性微球。

所述的酶反應物是含有堿性磷酸酶標記的E2抗原。

所述的反應增強劑是含有Tris的緩沖液。

所述稀釋液是含有BSA溶液。

所述的校準品及質控品是含有一定量的E2抗原的BSA蛋白溶液。

所述清洗液濃縮液是含有TWEEN-20和Proclin-300的緩沖液。

所述的底物溶液為酶促化學發光底物溶液。

本發明雌二醇(E2)的定量測定試劑盒的制備方法，包括下述步驟：

第一步：磁分離試劑的制備過程

一、磁珠緩沖液配制操作步驟，配制1L：

1、稱取TRIS?4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，稱取0.96g?TWEEN-20于20ml容器中加適量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；

2、用移液器將Proclin-300量取0.2ml于10ml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中，然后在上述1L容器中加入800ml純化水，充分攪拌；

3、調節PH計測量其PH值，調PH，控制PH在7.95-8.05之間；

4、稱取BSA?3g倒入上述1L容器中；

5、最后定容至1000ml，用0.2um濾器過濾；過濾完后貼好標簽于2-8℃冷庫貯存。

二、磁分離試劑的制備過程

1、將1.0mg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul?DMSO中，取2mg抗E2單克隆抗體溶于PH?9.5的0.1mol/L?PB緩沖液中至總體積為1ml；