[發(fā)明專利]游離甲狀腺素(FT4)定量測定試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110257796.5
• 申請日: 2011-08-31
• 公開（公告）號: CN102426255A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發(fā)明（設計）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權）人: 內(nèi)蒙古科慧生物科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/78
• 分類號: G01N33/78;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 北京富天民宏濟知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11272
• 代理人: 劉壽椿;龔雅民

技術領域

本發(fā)明涉及測定血清的試劑盒及其測試方法，尤其是涉及測定血清中游離甲狀腺素(FT4)含量的試劑盒及其測試方法。

背景技術

甲狀腺素或3，5，3’，5’一四碘甲腺原氨酸(Thyroxine，簡稱T4)是一種分子量為777的甲狀腺激素，在甲狀腺中由與一種特殊蛋白質(甲狀腺球蛋白)結合的酪氨酸碘化合成。甲狀腺素(T4)釋放入血液后，大部分與血漿蛋白結合，僅約極少量的T4呈游離狀態(tài)(Free?Thyroxine，F(xiàn)T4)存在于血液中。血清游離甲狀腺素(FT4)的生理濃度，不受機體甲狀腺結合球蛋白(TBG)濃度的影響，無論是生理性的TBG的增加，還是病理性的TBG減少，對FT4的生理濃度均無影響。測定血清F4對診斷甲狀腺功能性疾病，具有重要的臨床價值。FT4可作為下丘腦一垂體一甲狀腺軸疾病可疑患者的篩選指標之一。對妊娠婦女或危重的非甲狀腺疾病如肝硬化、腎功能衰竭患者的甲狀腺功能判斷很有價值。尤其在中樞神經(jīng)甲狀腺功能低下時，F(xiàn)T4含量測定更有價值。從檢測角度上來說，目前臨床上用于測定FT4的方法主要有放免法、ELISA法、化學發(fā)光法等。

過去以放免為代表的游離甲狀腺素(FT4)測定試劑盒受方法學的限制，其靈敏度和抗干擾能力嚴重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市場，目前應用較多的為酶聯(lián)免疫檢測技術和化學發(fā)光技術。化學發(fā)光技術興起于上個世紀80年代是繼酶聯(lián)免疫技術和放免技術之后發(fā)展起來的新興技術，由于其高靈敏度、高特異性，同時方法簡便、快速，標記結合物穩(wěn)定，無放射性同位素損傷和污染等特點，在近些年得到了飛速發(fā)展。

磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測技術是一種以磁性微粒為固相分離載體，將免疫磁微粒分離技術與酶聯(lián)免疫檢測技術相結合而建立的一種新型免疫檢測方法。傳統(tǒng)ELISA方法，抗原、抗體的結合反應是在固相(ELISA板反應孔)表面進行的，而磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測方法，抗原、抗體的結合反應也在近似液相的條件下進行，因而反應快速、徹底。與傳統(tǒng)ELISA相比具有靈敏度高，檢測用時少的優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明需要解決的技術問題在于提供一種游離甲狀腺素(FT4)定量測定試劑盒及其檢測方法，采用該試劑盒進行FT4檢測具有較高的靈敏度和特異性，和更短的獲得檢測結果的時間和更簡便的操作方式。

本發(fā)明提供了一種游離甲狀腺素(FT4)的定量測定試劑盒，其包含的試劑有FT4磁分離試劑，酶反應物，反應增強劑，稀釋液，校準品、質控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。

所述的磁分離試劑含有標記有抗FT4單克隆抗體的磁性微球。

所述的酶反應物是含有堿性磷酸酶標記的FT4抗原。

所述的反應增強劑是含有Tris的緩沖液。

所述稀釋液是含有BSA溶液。

所述的校準品及質控品是含有一定量的FT4抗原的BSA蛋白溶液。

所述清洗液濃縮液是含有TWEEN-20和Proclin-300的緩沖液。

所述的底物溶液為酶促化學發(fā)光底物溶液。

本發(fā)明游離甲狀腺素(FT4)的定量測定試劑盒的制備方法，包括下述步驟：

第一步：磁分離試劑的制備過程

一、磁珠緩沖液配制操作步驟，配制1L：

1、稱取TRIS?4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，稱取0.96g?TWEEN-20于20ml容器中加適量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；

2、用移液器將Proclin-300量取0.2ml于10ml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中，然后在上述1L容器中加入800ml純化水，充分攪拌；

3、調(diào)節(jié)PH計測量其PH值，調(diào)PH，控制PH在7.95-8.05之間；

4、稱取BSA?3g倒入上述1L容器中；

5、最后定容至1000ml，用0.2um濾器過濾；過濾完后貼好標簽于2-8℃冷庫貯存。

二、磁分離試劑的制備過程

1、將1.0mg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul?DMSO中，取2mg抗FT4單克隆抗體溶于PH?9.5的0.1mol/L?PB緩沖液中至總體積為1ml；

2、確定辛二酸二琥珀酰亞胺酯的投入量，用移液槍吸取辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中，置室溫90min；

3、將步驟2抗體溶液加入到Centricon-10濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機中在3000g下濃縮30min至體積為0.5ml；