[發明專利]人肌鈣蛋白I(Troponin I)定量測定試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201110257788.0
• 申請日: 2011-08-31
• 公開（公告）號: CN102426246A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 內蒙古科慧生物科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 北京富天民宏濟知識產權代理事務所(普通合伙) 11272
• 代理人: 劉壽椿;龔雅民

技術領域

本發明涉及測定血清的試劑盒及其測試方法，尤其是涉及測定血清中人肌鈣蛋白I(TROPONIN?I)含量的試劑盒及其測試方法。?

背景技術

人肌鈣蛋白由肌鈣蛋白I、T、C三亞基構成，和原肌球蛋白一起通過調節鈣離子對橫紋肌動蛋白ATP酶的活性來調節肌動蛋白和肌球蛋白相互作用。肌鈣蛋白I是一種由肌鈣蛋白-原肌球蛋白有序構成的復合抑制蛋白，它增強鈣離子對橫紋肌動蛋白ATP酶的活性的敏感性，由此調節橫紋肌動和肌球蛋白的相互作用。在快收縮和慢收縮骨骼肌纖維和心肌纖維中存在著不同的肌鈣蛋白I異構體，分子量為24000道爾頓的肌鈣蛋白I是存在于心肌中的特有物質，兩種骨骼肌和一種心肌的異構體其氨基酸序列顯示有40％不同源。抗心肌鈣蛋白I的抗體與另兩個骨骼肌的異構體的抗體在免疫學上也是不一致的。當心肌損傷后，心肌肌鈣蛋白復合物釋放到血液中，4-6小時后，開始在血液中升高，升高的肌鈣蛋白I能在血液中保持很長時間6-10天。肌鈣蛋白I具有高度心肌特異性和靈敏度，所以肌鈣蛋白I已成為目前較理想的心肌梗死標志物。從檢測角度上來說，目前臨床上用于測定TROPONIN?I的方法主要有放免法、ELISA法、化學發光法等。?

過去以放免為代表的人肌鈣蛋白I(TROPONIN?I)測定試劑盒受方法學的限制，其靈敏度和抗干擾能力嚴重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市場，目前應用較多的為酶聯免疫檢測技術和化學發光技術。化學發光技術興起于上個世紀80年代是繼酶聯免疫技術和放免技術之后發展起來的新興技術，由于其高靈敏度、高特異性，同時方法簡便、快速，標記結合物穩定，無放射性同位素損傷和污染等特點，在近些年得到了飛速發展。?

磁微粒分離酶聯免疫檢測技術是一種以磁性微粒為固相分離載體，將免疫磁微粒分離技術與酶聯免疫檢測技術相結合而建立的一種新型免疫檢測方法。傳統ELISA方法，抗原、抗體的結合反應是在固相(ELISA板反應孔)表面進行的，而磁微粒分離酶聯免疫檢測方法，抗原、抗體的結合反應也在近似液相的條件下進行，因而反應快速、徹底。與傳統ELISA相比具有靈敏度高，檢測用時少的優點。?

發明內容

本發明需要解決的技術問題在于提供一種人肌鈣蛋白I(TROPONIN?I)定量測定試劑盒?及其檢測方法，采用該試劑盒進行TROPONIN?I檢測具有較高的靈敏度和特異性，和更短的獲得檢測結果的時間和更簡便的操作方式。?

本發明提供了一種人肌鈣蛋白I(TROPONIN?I)的定量測定試劑盒，其包含的試劑有TROPONIN?I磁分離試劑，酶反應物，反應增強劑，稀釋液，校準品、質控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。?

所述的磁分離試劑含有標記有抗TROPONIN?I單克隆抗體的磁性微球。?

所述的酶反應物是含有堿性磷酸酶標記的抗TROPONIN?I單克隆抗體。?

所述的反應增強劑是含有Tris的緩沖液。?

所述稀釋液是含有BSA溶液。?

所述的校準品及質控品是含有一定量的TROPONIN?I抗原的BSA蛋白溶液。?

所述清洗液濃縮液是含有TWEEN-20和Proclin-300的緩沖液。?

所述的底物溶液為酶促化學發光底物溶液。?

本發明人肌鈣蛋白I(TROPONIN?I)的定量測定試劑盒的制備方法，包括下述步驟：?

第一步：磁分離試劑的制備過程?

一、磁珠緩沖液配制操作步驟，配制1L：?

1、稱取TRIS?4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，稱取0.96g?TWEEN-20于20ml容器中加適量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；?

2、用移液器將Proclin-300量取0.2ml于10ml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中，然后在上述1L容器中加入800ml純化水，充分攪拌；?

3、調節PH計測量其PH值，調PH，控制PH在7.95-8.05之間；?

4、稱取BSA?3g倒入上述1L容器中；?

5、最后定容至1000ml，用0.2um濾器過濾；過濾完后貼好標簽于2-8℃冷庫貯存。?

二、磁分離試劑的制備過程?

1、將1.0mg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul?DMSO中，取2mg抗TROPONIN?I單克隆抗體溶于PH?9.5的0.1mol/L?PB緩沖液中至總體積為1ml；?