[發明專利]一種真核表達重組質粒及其構建方法與穩定表達該質粒的Vero細胞系無效
| 申請號： | 201110257669.5 | 申請日： | 2011-09-01 |
| 公開（公告）號： | CN102321661A | 公開（公告）日： | 2012-01-18 |
| 發明（設計）人： | 趙建軍;閆如勛;閆喜軍 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院特產研究所 |
| 主分類號： | C12N15/79 | 分類號： | C12N15/79;C12N15/66;C12N5/10;C12N7/00 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 逯長明 |
| 地址： | 132000 吉林省*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 表達 重組 質粒 及其 構建 方法 穩定 vero 細胞系 | ||
【權利要求書】：
1.一種真核表達重組質粒，其特征在于，具有SEQ?ID?NO：1所示核苷酸序列。
2.如權利要求1所述質粒的制備方法，其特征在于，包括：
步驟1：以pMD18-T-rSLAM質粒為模板，在上游引物、下游引物的存在下擴增獲得所述融合基因，所述上游引物序列如SEQ?No.2所示，所述下游引物序列如SEQ?No.3所示；
步驟2：pIRES2-EGFP載體經酶切，獲得Pcmv、IRES、EGFP和SV40pA；
步驟3：取所述融合基因酶切后，與步驟2中所述Pcmv、所述IRES、所述EGFP和所述SV40pA連接，轉化受體菌，鑒定陽性克隆，獲得所述質粒。
3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述酶切為Xho?I和EcoR?I雙酶切。
4.一種Vero細胞系，其特征在于，Vero細胞中轉染如權利要求1所述的真核表達重組質粒后，經克隆及篩選，獲得細胞表面穩定表達有犬瘟熱病毒受體貉SLAM的細胞系。
5.如權利要求4所述的Vero細胞系在犬瘟熱強毒株的分離及其在犬瘟熱病毒研究中的應用。
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