[發明專利]肌酸激酶同工酶(CK-MB)定量測定試劑盒及其檢測方法無效

申請號：	201110257485.9	申請日：	2011-08-31
公開（公告）號：	CN102435738A	公開（公告）日：	2012-05-02
發明（設計）人：	不公告發明人	申請（專利權）人：	內蒙古科慧生物科技有限責任公司
主分類號：	G01N33/577	分類號：	G01N33/577;G01N21/76
代理公司：	北京富天民宏濟知識產權代理事務所(普通合伙) 11272	代理人：	劉壽椿;龔雅民
地址：	012000 內蒙古自治區烏蘭察***	國省代碼：	內蒙古;15
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摘要：
搜索關鍵詞：	肌酸激酶 ck mb 定量測定試劑盒及其檢測方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及測定血清的試劑盒及其測試方法，尤其是涉及測定人血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量的試劑盒及其測試方法。

背景技術

人類肌酸激酶同工酶分子量是85745。CK-MB主要分布于心肌中。當心肌損傷后，CK-MB釋放到血液中，3-8h后開始升高，可持續3-5天。肌鈣蛋白，肌紅蛋白，肌酸激酶同工酶這三項聯合檢測能今早檢測出心肌是否受損。CK是由M和B亞單位組成的二聚體，兩種不同的亞基組成三種同工酶。CK-BB(CK1)主要存于腦組織CK-MB(CK2)主要存于心肌CK-MM(CK3)主要存于骨骼肌組織此外在線粒體中還存在一種同工酶(CK-MiMi)。心肌不同部位CK-MB含量也不盡相同，前壁＞后壁，右心室＞左心室，所以不同部位AMI時MB的釋放量不僅與梗塞面積、程度有關，也和梗塞部位有關。

CK-MB是診斷急性心肌梗死最有價值酶學生化指標。(1)通常血漿中的CK-MB來自心肌，若患者具有CK-MB活性升高和下降的序列性變化，且峰值超過參考值上限2倍，又無其他原因可解釋時，應考慮AMI。CK-MB質量用于胸痛發作3小時后診斷AMI陽性率可達50％.6小時的診斷陽性率可達到80％.(2)AMI發作后如未進行溶栓治療，CK-MB通常在3～8小時出現升高，達峰時在發病后9～30小時，于48～72小時恢復至正常水平。與總CK測定比較，CK-MB的峰時稍有提前，且消失也較快。(3)以血清CK-MB水平評價AMI的梗塞面積大小存在一定的爭論，一般認為，梗塞范圍較小者，CK-MB達峰時間較早，恢復正常時間較短。(4)溶栓治療時，CK-MB早期升高及短時間內達峰是AMI的征兆。2.關于不穩定性心絞痛(UAP)當心肌缺血時CK-MB常不增高，故UAP患者大多數無CK-MB增高，即便增高也不超過正常上限的2倍。3.CK-MB并不對心肌完全特異，在骨骼肌中也少量存在。

過去以放免為代表的肌酸激酶同工酶(CK-MB)測定試劑盒受方法學的限制，其靈敏度和抗干擾能力嚴重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市場，目前應用較多的為酶聯免疫檢測技術和化學發光技術。化學發光技術興起于上個世紀80年代是繼酶聯免疫技術和放免技術之后發展起來的新興技術，由于其高靈敏度、高特異性，同時方法簡便、快速，標記結合物穩定，無放射性同位素損傷和污染等特點，在近些年得到了飛速發展。

磁微粒分離酶聯免疫檢測技術是一種以磁性微粒為固相分離載體，將免疫磁微粒分離技術與酶聯免疫檢測技術相結合而建立的一種新型免疫檢測方法。傳統ELISA方法，抗原、抗體的結合反應是在固相(ELISA板反應孔)表面進行的，而磁微粒分離酶聯免疫檢測方法，抗原、抗體的結合反應也在近似液相的條件下進行，因而反應快速、徹底。與傳統ELISA相比具有靈敏度高，檢測用時少的優點。

發明內容

本發明需要解決的技術問題在于提供一種肌酸激酶同工酶(CK-MB)定量測定試劑盒及其檢測方法，采用該試劑盒進行CK-MB檢測具有較高的靈敏度和特異性，和更短的獲得檢測結果的時間和更簡便的操作方式。

本發明提供了一種肌酸激酶同工酶(CK-MB)的定量測定試劑盒，其包含的試劑有CK-MB磁分離試劑，酶反應物，反應增強劑，稀釋液，校準品、質控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。

所述的磁分離試劑含有標記有抗CK-MB單克隆抗體的磁性微球。

所述的酶反應物是含有堿性磷酸酶標記的抗CK-MB單克隆抗體。

所述的反應增強劑是含有Tris的緩沖液。

所述稀釋液是含有BSA溶液。

所述的校準品及質控品是含有一定量的CK-MB抗原的BSA蛋白溶液。

所述清洗液濃縮液是含有TWEEN-20和Proclin-300的緩沖液。

所述的底物溶液為酶促化學發光底物溶液。

本發明肌酸激酶同工酶(CK-MB)的定量測定試劑盒的制備方法，包括下述步驟：

第一步：磁分離試劑的制備過程