[發明專利]總甲狀腺素(TT4)定量測定試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201110257473.6
• 申請日: 2011-08-31
• 公開（公告）號: CN102426254A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 內蒙古科慧生物科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/78
• 分類號: G01N33/78;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 北京富天民宏濟知識產權代理事務所(普通合伙) 11272
• 代理人: 劉壽椿;龔雅民

技術領域

本發明涉及測定血清的試劑盒及其測試方法，尤其是涉及測定血清中總甲狀腺素(Total?Thyroxine，TT4)含量的試劑盒及其測試方法。

背景技術

甲狀腺素或3，5，3’，5’-四碘甲腺原氨酸(T4)是一種分子量為777的甲狀腺激素，在甲狀腺中由與一種特殊蛋白質(甲狀腺球蛋白)結合的酪氨酸碘化合成。甲狀腺素(T4)是甲狀腺分泌的主要激素，它本身沒有活性。T4在5脫碘酶作用下轉化為具有生物活性的三碘甲腺原氨酸后經過一系列的反應最終合成具有生物功能的蛋白質，從而發揮甲狀腺激素的生物效應。血液循環系統甲狀腺激素的水平，常常反映甲狀腺的功能。測定血清中總T4含量，是判斷甲狀腺功能最常用的檢查指標。T4增高見于甲亢、T4型甲亢、亞急性甲狀腺炎、高TBG血癥、甲狀腺激素不敏感綜合癥；減低見于甲減、地方性甲狀腺腫、慢性淋巴性甲狀腺腫、甲亢治療期、嚴重肝病、TBG降低。總T4(Total?Thyroxine，TT4)的測定通常作為診斷甲狀腺功能低下最好的單項指標，與TSH聯合使用是目前診斷新生兒先天性甲低的唯一方法。從檢測角度上來說，目前臨床上用于測定TT4的方法主要有放免法、ELISA法、化學發光法等。

過去以放免為代表的總甲狀腺素(TT4)測定試劑盒受方法學的限制，其靈敏度和抗干擾能力嚴重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市場，目前應用較多的為酶聯免疫檢測技術和化學發光技術。化學發光技術興起于上個世紀80年代是繼酶聯免疫技術和放免技術之后發展起來的新興技術，由于其高靈敏度、高特異性，同時方法簡便、快速，標記結合物穩定，無放射性同位素損傷和污染等特點，在近些年得到了飛速發展。

磁微粒分離酶聯免疫檢測技術是一種以磁性微粒為固相分離載體，將免疫磁微粒分離技術與酶聯免疫檢測技術相結合而建立的一種新型免疫檢測方法。傳統ELISA方法，抗原、抗體的結合反應是在固相(ELISA板反應孔)表面進行的，而磁微粒分離酶聯免疫檢測方法，抗原、抗體的結合反應也在近似液相的條件下進行，因而反應快速、徹底。與傳統ELISA相比具有靈敏度高，檢測用時少的優點。

發明內容

本發明需要解決的技術問題在于提供一種總甲狀腺素(TT4)定量測定試劑盒及其檢測方法，采用該試劑盒進行TT4檢測具有較高的靈敏度和特異性，和更短的獲得檢測結果的時間和更簡便的操作方式。

本發明提供了一種總甲狀腺素(TT4)的定量測定試劑盒，其包含的試劑有TT4磁分離試劑，酶反應物，反應增強劑，稀釋液，校準品、質控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。

所述的磁分離試劑含有標記有抗TT4單克隆抗體的磁性微球。

所述的酶反應物是含有堿性磷酸酶標記的TT4抗原。

所述的反應增強劑是含有Tris的緩沖液。

所述稀釋液是含有BSA溶液。

所述的校準品及質控品是含有一定量的TT4抗原的BSA蛋白溶液。

所述清洗液濃縮液是含有TWEEN-20和Proclin-300的緩沖液。

所述的底物溶液為酶促化學發光底物溶液。

本發明總甲狀腺素(TT4)的定量測定試劑盒的制備方法，包括下述步驟：

第-步：磁分離試劑的制備過程

一、磁珠緩沖液配制操作步驟，配制1L：

1、稱取TRIS?4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，稱取0.96g?TWEEN-20于20ml容器中加適量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；

2、用移液器將Proclin-300量取0.2ml于10ml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中，然后在上述1L容器中加入800ml純化水，充分攪拌；

3、調節PH計測量其PH值，調PH，控制PH在7.95-8.05之間；

4、稱取BSA?3g倒入上述1L容器中；

5、最后定容至1000ml，用0.2um濾器過濾；過濾完后貼好標簽于2-8℃冷庫貯存。

二、磁分離試劑的制備過程

1、將1.0mg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul?DMSO中，取2mg抗TT4單克隆抗體溶于PH?9.5的0.1mol/L?PB緩沖液中至總體積為1ml；

2、確定辛二酸二琥珀酰亞胺酯的投入量，用移液槍吸取辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中，置室溫90min；

3、將步驟2抗體溶液加入到Centricon-10濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機中在3000g下濃縮30min至體積為0.5ml；