[發明專利]促黃體生成激素(LH)定量測定試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201110257444.X
• 申請日: 2011-08-31
• 公開（公告）號: CN102419374A
• 公開（公告）日: 2012-04-18
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 內蒙古科慧生物科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/531
• 代理公司: 北京富天民宏濟知識產權代理事務所(普通合伙) 11272
• 代理人: 劉壽椿;龔雅民

技術領域

本發明涉及測定血清的試劑盒及其測試方法，尤其是涉及測定血清中促黃體生成激素(LH)含量的試劑盒及其測試方法。

背景技術

促黃體生成激素(LH)是由垂體前葉分泌的糖蛋白激素，其分子量大約為30,000，由兩條多肽鏈(即α和β亞單位)組成。在女性中，LH在卵泡期與FSH一起促進卵泡的成熟、雌性激素的合成和分泌；促進排卵和使排卵后的卵泡轉變為黃體，促進間質的生長，并促進黃體合成和孕激素與雌性激素的分泌，對女體內LH的定量檢測常被用來判斷女性的排卵狀況；男性LH促進睪丸間質細胞增生，促進其合成和分泌睪丸酮，由于LH和FSH的作用是互相協同的，故二者常同時測定。LH常與其他性腺激素一起用于男女不孕不育癥的診斷與治療，也用于分析月經性疾病和下丘腦-垂體-性腺軸功能的評價。LH還可作為青少年性早熟和發育遲緩的診斷依據之一。

過去以放免為代表的促黃體生成激素(LH)測定試劑盒受方法學的限制，其靈敏度和抗干擾能力嚴重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市場，目前應用較多的為酶聯免疫檢測技術和化學發光技術。化學發光技術興起于上個世紀80年代是繼酶聯免疫技術和放免技術之后發展起來的新興技術，由于其高靈敏度、高特異性，同時方法簡便、快速，標記結合物穩定，無放射性同位素損傷和污染等特點，在近些年得到了飛速發展。

磁微粒分離酶聯免疫檢測技術是一種以磁性微粒為固相分離載體，將免疫磁微粒分離技術與酶聯免疫檢測技術相結合而建立的一種新型免疫檢測方法。傳統ELISA方法，抗原、抗體的結合反應是在固相(ELISA板反應孔)表面進行的，而磁微粒分離酶聯免疫檢測方法，抗原、抗體的結合反應也在近似液相的條件下進行，因而反應快速、徹底。與傳統ELISA相比具有靈敏度高，檢測用時少的優點。

發明內容

本發明需要解決的技術問題在于提供一種促黃體生成激素(LH)定量測定試劑盒及其檢測方法，采用該試劑盒進行LH檢測具有較高的靈敏度和特異性，和更短的獲得檢測結果的時間和更簡便的操作方式。

本發明提供了一種促黃體生成激素(LH)的定量測定試劑盒，其包含的試劑有LH磁分離試劑，酶反應物，反應增強劑，稀釋液，校準品、質控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。

所述的磁分離試劑含有標記有抗LH單克隆抗體的磁性微球。

所述的酶反應物是含有堿性磷酸酶標記的抗LH單克隆抗體。

所述的反應增強劑是含有Tris的緩沖液。

所述稀釋液是含有BSA溶液。

所述的校準品及質控品是含有一定量的LH抗原的BSA蛋白溶液。

所述清洗液濃縮液是含有TWEEN-20和Proclin-300的緩沖液。

所述的底物溶液為酶促化學發光底物溶液。

本發明促黃體生成激素(LH)的定量測定試劑盒的制備方法，包括下述步驟：

第一步：磁分離試劑的制備過程

一、磁珠緩沖液配制操作步驟，配制1L：

1、稱取TRIS?4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，稱取0.96g?TWEEN-20于20ml容器中加適量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；

2、用移液器將Proclin-300量取0.2ml于10ml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中，然后在上述1L容器中加入800ml純化水，充分攪拌；

3、調節PH計測量其PH值，調PH，控制PH在7.95-8.05之間；

4、稱取BSA?3g倒入上述1L容器中；

5、最后定容至1000ml，用0.2um濾器過濾；過濾完后貼好標簽于28℃冷庫貯存。

二、磁分離試劑的制備過程

1、將1.0mg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul?DMSO中，取2mg抗LH單克隆抗體溶于PH?9.5的0.1mol/L?PB緩沖液中至總體積為1ml；

2、確定辛二酸二琥珀酰亞胺酯的投入量，用移液槍吸取辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中，置室溫90min；

3、將步驟2抗體溶液加入到Centricon-10濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機中在3000g下濃縮30min至體積為0.5ml；

4、取0.5ml磁珠，加入5ml反應杯中，放入專用試管架，經磁鐵吸附2分鐘后吸取上清；

5、每次加入1.5ml?PH9.5?0.1mol/L?PB，混勻30秒，上架，去上清，重復操作3次；將步驟4獲得的抗體溶液加入到上述磁珠中，混勻后室溫反應4小時；