[發(fā)明專利]胃蛋白酶原II(PGII)定量測定試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110257440.1
• 申請日: 2011-08-31
• 公開（公告）號: CN102426236A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古科慧生物科技有限責(zé)任公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 北京富天民宏濟(jì)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11272
• 代理人: 劉壽椿;龔雅民

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及測定血清的試劑盒及其測試方法，尤其是涉及測定血清中胃蛋白酶原II(PGII)含量的試劑盒及其測試方法。

背景技術(shù)

胃蛋白酶原(PePsinogen，PG)是胃液中胃蛋白酶的無活性前體，人胃蛋白酶可分為兩種生化和免疫活性特征不同的胃蛋白酶原鴨群：按胃蛋白酶原在瓊脂凝膠電泳下的遷移率由快至慢份Pg1-Pg7七種同工酶原，其中Pg1-Pg5有共同的免疫原性，合稱PGI(又稱PGA)；血清PG水平反映了不同部位胃粘膜的形態(tài)和功能：PGI是檢測胃泌酸腺細(xì)胞功能的指針，胃酸分泌增多PGI升高，分泌減少或胃粘膜腺體萎縮PGI降低；PGII與胃底粘膜病變的相關(guān)性較大(相對于胃竇粘膜)，其升高與胃底腺管萎縮、胃上皮化生或假幽門腺化生、異型增值有關(guān)；PGI/II比值進(jìn)行性降低與胃粘膜萎縮進(jìn)展相關(guān)。因此，聯(lián)合測定PGI和PGII比值可起到胃底腺粘膜“血清學(xué)活檢”的作用。

過去以放免為代表的胃蛋白酶原II(PGII)測定試劑盒受方法學(xué)的限制，其靈敏度和抗干擾能力嚴(yán)重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市場，目前應(yīng)用較多的為酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)和化學(xué)發(fā)光技術(shù)。化學(xué)發(fā)光技術(shù)興起于上個世紀(jì)80年代是繼酶聯(lián)免疫技術(shù)和放免技術(shù)之后發(fā)展起來的新興技術(shù)，由于其高靈敏度、高特異性，同時方法簡便、快速，標(biāo)記結(jié)合物穩(wěn)定，無放射性同位素?fù)p傷和污染等特點(diǎn)，在近些年得到了飛速發(fā)展。

磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)是一種以磁性微粒為固相分離載體，將免疫磁微粒分離技術(shù)與酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)相結(jié)合而建立的一種新型免疫檢測方法。傳統(tǒng)ELISA方法，抗原、抗體的結(jié)合反應(yīng)是在固相(ELISA板反應(yīng)孔)表面進(jìn)行的，而磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測方法，抗原、抗體的結(jié)合反應(yīng)也在近似液相的條件下進(jìn)行，因而反應(yīng)快速、徹底。與傳統(tǒng)ELISA相比具有靈敏度高，檢測用時少的優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題在于提供一種胃蛋白酶原II(PGII)定量測定試劑盒及其檢測方法，采用該試劑盒進(jìn)行PGII檢測具有較高的靈敏度和特異性，和更短的獲得檢測結(jié)果的時間和更簡便的操作方式。

本發(fā)明提供了一種胃蛋白酶原II(PGII)的定量測定試劑盒，其包含的試劑有PGII磁分離試劑，酶反應(yīng)物，反應(yīng)增強(qiáng)劑，稀釋液，校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。

所述的磁分離試劑含有標(biāo)記有抗PGII單克隆抗體的磁性微球。

所述的酶反應(yīng)物是含有堿性磷酸酶標(biāo)記的抗PGII單克隆抗體。

所述的反應(yīng)增強(qiáng)劑是含有Tris的緩沖液。

所述稀釋液是含有BSA溶液。

所述的校準(zhǔn)品及質(zhì)控品是含有一定量的PGII抗原的BSA蛋白溶液。

所述清洗液濃縮液是含有TWEEN-20和Proclin-300的緩沖液。

所述的底物溶液為酶促化學(xué)發(fā)光底物溶液。

本發(fā)明胃蛋白酶原II(PGII)的定量測定試劑盒的制備方法，包括下述步驟：

第一步：磁分離試劑的制備過程

一、磁珠緩沖液配制操作步驟，配制1L：

1、稱取TRIS?4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，稱取0.96g?TWEEN-20于20ml容器中加適量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；

2、用移液器將Proclin-300量取0.2ml于10ml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中，然后在上述1L容器中加入800ml純化水，充分?jǐn)嚢瑁?/p>

3、調(diào)節(jié)PH計測量其PH值，調(diào)PH，控制PH在7.95-8.05之間；

4、稱取BSA?3g倒入上述1L容器中；

5、最后定容至1000ml，用0.2um濾器過濾；過濾完后貼好標(biāo)簽于2-8℃冷庫貯存。

二、磁分離試劑的制備過程

1、將1.0mg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul?DMSO中，取2mg抗PGII單克隆抗體溶于PH?9.5的0.1mol/L?PB緩沖液中至總體積為1ml；

2、確定辛二酸二琥珀酰亞胺酯的投入量，用移液槍吸取辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中，置室溫90min；

3、將步驟2抗體溶液加入到Centricon-10濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機(jī)中在3000g下濃縮30min至體積為0.5ml；

4、取0.5ml磁珠，加入5ml反應(yīng)杯中，放入專用試管架，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取上清；