[發(fā)明專利]防治棉花枯黃萎病的合劑

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110254934.4
• 申請日: 2011-08-31
• 公開（公告）號: CN102524303A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭堅華;劉紅霞;王云鵬;鄭麗
• 申請（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01N63/00
• 分類號: A01N63/00;A01P3/00;A01P21/00
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

1.一種防治棉花枯、黃萎病的生防復(fù)合菌劑BB1623，含兩種細(xì)菌成分：分別是短小芽孢桿菌CS23（Bacillus?pumilus）和枯草芽孢桿菌SM16（Bacillus?subtilis），短小芽孢桿菌CS23（Bacillus?pumilus），于2011年04月02日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址?北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院?中科院微生物研究所，菌種保藏號為CGMCC?NO.4735；枯草芽孢桿菌SM16(Bacillus?subtilis)于2009年6月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址?北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院?中科院微生物研究所，菌種保藏號為CGMCC?NO.3127。

2.權(quán)利要求1所述的一種防治棉花枯、黃萎病的生防復(fù)合菌劑BB1623的制備方法，其特征在于，

???1）將權(quán)利要求1所述的菌株CS23和SM16分別接種到LB培養(yǎng)液中30℃培養(yǎng)180?rpm振蕩培養(yǎng)，12～16小時后在超凈工作臺中分別取樣測600nm處的OD值，測定過程中以未接菌的培養(yǎng)液來調(diào)零；

2）當(dāng)培養(yǎng)至OD值在0.5～0.8之間時，將種子菌液以1：100體積比加入裝有發(fā)酵培養(yǎng)液的200?L發(fā)酵罐中，30℃?250?rpm振蕩培養(yǎng)20～24小時，發(fā)酵液pH值維持在7.0，溶氧量20%，通氣量5～7?m³/小時，罐壓?0.05～0.1KPa，然后6000?rpm離心10?min，每1000?ml培養(yǎng)液獲得13～16?g濕菌，每克濕菌含3×10¹⁰～10¹⁵個菌體，取濕菌分別與菌體保藏液按1?g：40ml配成菌株CS23和SM16單菌菌劑，再將兩種細(xì)菌單劑按照單菌活菌數(shù)量1:1配成混合制劑BB1623，合劑中活菌總濃度為1×10⁸～10¹²CFU/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其中LB培養(yǎng)液及發(fā)酵培養(yǎng)液配方如下：

1）LB培養(yǎng)液：氯化鈉10?g/L,?胰蛋白胨10?g/L,?酵母浸粉5?g/L，調(diào)節(jié)pH值為7.2，然后121℃滅菌20?min；

2）CS23發(fā)酵培養(yǎng)液：麥芽糖2.0?g/L,?玉米粉4?g/L,馬鈴薯粉4.5?g/L,?蛋白胨3?g/L,?二水氯化鈣?0.2?g/L，一水硫酸錳?0.2?g/L,?磷酸氫二鉀.2?g/L，調(diào)節(jié)pH值為7.0～7.2；

SM16發(fā)酵培養(yǎng)液：麥芽糖1.0?g/L,?玉米粉2.5?g/L,黃豆粉2.5?g/L,?蛋白胨3.5?g/L,?二水氯化鈣?0.1?g/L，一水硫酸錳?0.1?g/L,?磷酸氫二鉀0.15?g/L，調(diào)節(jié)pH值為7.2～7.4；

3）菌體保藏液：

a.?短小芽孢桿菌CS23菌體保藏液的制備：pH6.8，0.03mol/L的磷酸鹽緩沖液中加入Tween20至Tween20在緩沖液中的終濃度為0.02mol/L即得菌體保藏液；

b.?枯草芽孢桿菌SM16菌體保藏液的制備：pH7.0，0.15?mol/L的Tris緩沖液中加入聚氧乙基脂肪酸酯至聚氧乙基脂肪酸酯在緩沖液中的終濃度為0.01?mol/L即得菌體保藏液。

4.權(quán)利要求1～3之一所述的生防復(fù)合菌劑BB1623在防治棉花枯、黃萎病中的應(yīng)用。