[發明專利]一種循環血DNA提取方法和相關的循環血DNA提取試劑盒

無效

• 申請號: 201110252046.9
• 申請日: 2011-08-30
• 公開（公告）號: CN102286468A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 趙翊均
• 申請（專利權）人: 江蘇百帝生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 王潔

技術領域

本發明涉及DNA提取技術領域，特別涉及循環血DNA提取技術領域，具體是指一種循環血DNA提取方法和相關的循環血DNA提取試劑盒。

背景技術

人血漿中存在游離基因組DNA，這些DNA分子是在細胞凋亡或死亡后釋放到外周血中的，檢測分析游離gDNA有很重要的臨床意義：許多疾病狀態下，比如中風、心肌梗塞、糖尿病及許多惡性腫瘤患者血漿游離gDNA會顯著升高。因此血漿游離gDNA濃度可以作為疾病進展的一個臨床指標，對于惡性腫瘤患者血漿中游離gDNA的檢測分析更具有重要意義，因為這些gDNA分子直接來自腫瘤細胞，對其進行基因分析可以獲得腫瘤惡性程度的全部信息，可以為腫瘤的診斷和治療提供重要的依據。由于在孕婦外周血中存在胎兒的游離gDNA，因此，血漿游離gDNA分析還可以作為產前診斷的重要方法。

由于血漿游離gDNA片段小，含量低，在提取過程中容易丟失，其濃度在ng/mL水平，無法用紫外分光光度法檢測。需要很高的提取效率和穩定的得率才能應用于定量和相關檢測。傳統的苯酚/氯仿抽提法操作者需要接觸苯酚、氯仿這些有害物質，影響人體健康。也有專利采用硅柱吸附法，其原理是利用DNA分子一定鹽濃度下能與收集硅柱可逆吸附來提取純化DNA。但是該方法抽提效率較低，操作繁瑣，需要專用的DNA吸附柱，無法反復利用，成本高。

因此，需要一種循環血DNA提取方法，其抽提效率高、操作簡便、成本低廉、安全環保。

發明內容

本發明的目的是為了克服上述現有技術中的缺點，提供一種循環血DNA提取方法和相關的循環血DNA提取試劑盒，該循環血DNA提取方法設計巧妙，抽提效率高、操作簡便、成本低廉、安全環保，適于大規模推廣應用。

為了實現上述目的，在本發明的第一方面，提供了一種循環血DNA提取方法，其特點是，采用酸化預處理的硅珠濁液提取循環血DNA，例如血漿中游離基因組DNA、病毒DNA等等。

所述硅珠濁液可以采用任何合適的方法制備，較佳地，所述硅珠濁液是將硅珠震蕩分散在液體中然后經過所述酸化預處理形成。液體可以是任何合適的液體，比如水，或者常規的DNA提取緩沖液等等。

所述酸化預處理可以采用任何合適的方式，較佳地，所述酸化預處理通過加入酸實現。

酸通常是無機酸，例如鹽酸、硝酸等等，也可以是有機酸，例如醋酸、甲酸等等。更佳地，所述酸是鹽酸。

所述硅珠濁液的pH值小于7即可，較佳地，所述硅珠濁液的pH值為2.0。

為了避免蛋白污染，較佳地，在所述血漿中還加入蛋白酶K。

為了將細胞中的DNA完全釋放出來，較佳地，在所述血漿中還加入裂解緩沖液。

所述裂解緩沖液可以是DNA提取所用的常見的裂解緩沖液，更佳地，所述是0.2MTris-HCl，0.5％SDS，pH?7.0。

采用酸化預處理的硅珠濁液提取循環血DNA之后，還可以進行常規DNA提取后續步驟進行純化，例如采用洗滌緩沖液洗滌，乙醇重新沉淀等等，這些均是現有技術，這里不再贅述。

在本發明的第二方面，提供了一種循環血DNA提取試劑盒，其特點是，包括用于配制上述的循環血DNA提取方法中使用的硅珠濁液的硅珠。

在本發明的第三方面，提供了一種循環血DNA提取試劑盒，其特點是，包括用于上述的循環血DNA提取方法的硅珠濁液。

本發明的有益效果具體如下：本發明的循環血DNA提取方法采用酸化預處理的硅珠濁液提取循環血DNA，安全無毒，操作者不需接觸苯酚，氯仿等有害物質，操作簡便，主要儀器只需一架臺式離心機，抽提效率高，對循環血中的短DNA抽提效率顯著優于過柱法，純化效率可達70％以上，足以滿足常規分子生物學需求，成本低廉，不需要專用的DNA吸附柱，因此，設計巧妙，抽提效率高、操作簡便、成本低廉、安全環保，適于大規模推廣應用。

具體實施方式

為了能夠更清楚地理解本發明的技術內容，特舉以下實施例詳細說明。應理解，實施例僅是用于說明本發明，而不是對本發明的限制。

實施例1

1試劑

1.1二氧化硅粉末SiO₂

室溫保存。

1.21N?HCl

室溫保存。用12N濃鹽酸配制。

1.3裂解緩沖液

0.2M?Tris-HCl，0.5％SDS，pH?7.0。室溫保存。

1.4蛋白酶K

-20℃凍存，30U/mg。

1.5洗滌緩沖液