[發(fā)明專利]用細胞系生產(chǎn)兔瘟疫苗的方法及其制品

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110250765.7
• 申請日: 2011-08-26
• 公開（公告）號: CN102952784A
• 公開（公告）日: 2013-03-06
• 發(fā)明（設計）人: 張許科;孫進忠;白朝勇
• 申請（專利權(quán)）人: 普萊柯生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京華夏正合知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用細胞系生產(chǎn)兔瘟疫苗的方法及其制品，屬于獸用疫苗領(lǐng)域。

背景技術(shù)

兔病毒性出血癥(rabbit?heamorrhagic?disease，RHD)是1984年由我國首次發(fā)現(xiàn)并報道的新病毒病。由于其發(fā)病急、傳播快、發(fā)病率和死亡率都相當高，所以又俗稱“兔瘟”，是兔的一種以全身性出血和多發(fā)性血管內(nèi)凝血為主要癥狀的急性、烈性、病毒性傳染病。目前，國內(nèi)各省(市)均有流行。意大利、德國、法國、前捷克斯洛伐克、前蘇聯(lián)、西班牙、墨西哥、朝鮮和日本等國家也有發(fā)生。給全世界養(yǎng)兔業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失，國際獸醫(yī)局將該病列為B類傳染病，我國農(nóng)業(yè)部96號令頒布為二類疫病。RHD出現(xiàn)比較突然且流行速度極快，現(xiàn)有研究結(jié)果表明世界范圍內(nèi)的所有RHDV分離株均為同一血清型，無論是遺傳特性還是抗原性都很穩(wěn)定。

目前用兔病毒性出血癥組織滅活疫苗免疫是預防該病的主要措施，疫苗的制備過程中必須以RHDV感染致死的兔內(nèi)臟組織為原料。如中國專利CN88108859.5公開了一種用病兔肝組織培養(yǎng)RHD病毒及生產(chǎn)兔瘟疫苗的方法，但該方法疫苗的制備過程中必須以RHDV感染致死的兔內(nèi)臟組織為原料，而用于制備組織滅活疫苗的非免疫兔的供應量卻很不穩(wěn)定，造成傳統(tǒng)的組織滅活疫苗的成本不斷增加，另外組織滅活疫苗存在散播強毒的潛在危險、批間差異大、產(chǎn)量不高等種種缺點。

近年來，隨著兔產(chǎn)品等行業(yè)的興起以及其他動物疫苗等對家兔的需求的增加，市場對兔病毒性出血癥疫苗的需求量增加了許多，但是用于制備組織滅活疫苗的非免疫兔的供應量卻很不穩(wěn)定，造成傳統(tǒng)的組織滅活疫苗的成本不斷增加，加之組織滅活疫苗存在散播強毒的潛在危險、批間差異大、產(chǎn)量不高等種種缺點，組織滅活疫苗的廣泛應用受到一定的限制。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處，提供一種用細胞系生產(chǎn)兔瘟疫苗的方法，特別是使用常見易培養(yǎng)的細胞系如RK13、ST、VeroE6、BHK-21、PK-15、IBRS-2等細胞系生產(chǎn)RHD病毒及疫苗的方法。該方法使用培養(yǎng)病毒的細胞系是成熟的商業(yè)化的細胞系，具有生產(chǎn)工藝簡單穩(wěn)定、易操作，病毒含量高，批間差異小，質(zhì)量易控，可顯著提高疫苗產(chǎn)量和質(zhì)量。利用本發(fā)明生產(chǎn)的兔瘟疫苗安全性好、免疫力高，對兔瘟強毒攻擊具有完全的免疫保護作用。

本發(fā)明的主要目的在于提供一種用細胞系生產(chǎn)兔瘟病毒的方法，包括以下步驟：

1)細胞的培養(yǎng)：將細胞系經(jīng)消化傳代，以細胞培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，形成生長良好的細胞單層；

2)病毒接種與吸附：將兔瘟病毒接種于上述生長良好的細胞單層，進行病毒吸附；

3)細胞的孵育：換用細胞維持液培養(yǎng)后，加入孵育劑進行細胞的孵育；

4)病毒的繁殖：將上述孵育劑洗去，重新加入細胞維持液培養(yǎng)細胞系以繁殖兔瘟病毒；

5)病毒的收獲：收獲含有兔瘟病毒的培養(yǎng)液。

優(yōu)選地，本發(fā)明步驟2)中用于接種的兔瘟病毒為使用細胞系生產(chǎn)的兔瘟病毒。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的細胞為：RK13細胞、ST細胞、VeroE6細胞、BHK-21細胞、PK-15細胞、IBRS-2細胞的任意一種或幾種。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的細胞系為：RK13細胞。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的孵育劑為D-氨基葡萄糖、干擾素或脂多糖。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的孵育時間為20-40分鐘；更優(yōu)選地，孵育時間為30分鐘。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的細胞生長液為含血清的培養(yǎng)液，其中血清含量為1％-7％v/v；更優(yōu)選地，所述細胞生長液的血清含量為5％-6％，最優(yōu)地，血清含量為6％。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的細胞維持液為無血清的培養(yǎng)液。

本發(fā)明的另一主要目的在于提供如上述的方法制備的兔瘟病毒，其中，使用細胞系生產(chǎn)兔瘟病毒。

本發(fā)明的另一主要目的在于：提供一種用細胞系生產(chǎn)兔瘟疫苗的方法：使用上述方法生產(chǎn)的兔瘟病毒，加入滅活劑，滅活后加入獸藥學上可接受的疫苗佐劑制備為兔瘟疫苗。

本發(fā)明的另一主要目的還在于提供一種用細胞系生產(chǎn)的兔瘟疫苗，其中，使用了細胞系用于生產(chǎn)兔瘟疫苗。