[發明專利]一種以大孔陰離子樹脂為填充料的果糖基轉移酶的初純化方法

無效

• 申請號: 201110249360.1
• 申請日: 2011-08-29
• 公開（公告）號: CN102286439A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 李玉;荊瑋;劉逸寒;劉曉光;王穩航;路福平
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12R1/685
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 王來佳

1.一種以大孔陰離子樹脂為填充料的果糖基轉移酶的初純化方法，其特征在于：將經預處理大孔陰離子樹脂裝層析柱，用20mmol/mL的pH值為6.5磷酸緩沖液以2.0mL/min的流速通過層析柱，平衡層析柱，將含有果糖基轉移酶的粗酶液上樣，用兩倍體積的磷酸緩沖液洗脫，再用兩倍體積的磷酸緩沖液配置的1mol/mL的NaCl溶液梯度洗脫，用UV280nm在線監測，收集有酶活的峰，將收集到有酶活的酶液濃縮即得果糖基轉移酶。

2.根據權利要求1所述的以大孔陰離子樹脂為填充料的果糖基轉移酶的初純化方法，其特征在于：所述大孔陰離子樹脂為大孔陰離子樹脂D290。

3.根據權利要求1所述的以大孔陰離子樹脂為填充料的果糖基轉移酶的初純化方法，其特征在于：所述預處理大孔陰離子樹脂的方法為：大孔陰離子樹脂先用蒸餾水浸泡4h溶脹，除雜，然后用0.1mol/L的鹽酸浸泡2h，去離子水沖洗至中性；再用0.1mol/L的氫氧化鈉浸泡2h，用去離子水沖洗至中性，用2倍體積的去離子水浸泡，放置于4℃保存備用。

4.根據權利要求1所述的以大孔陰離子樹脂為填充料的果糖基轉移酶的初純化方法，其特征在于：所述果糖基轉移酶的粗酶液的制備方法如下：

將經過發酵培養的菌絲體，離心洗凈，收集菌絲體，將菌絲溶于5倍體積的水，球磨機5000r/min條件下20min，球磨兩次，然后在超高壓均質機1000Pa破壁兩次，冷凍離心，超濾濃縮得到粗酶液。

5.根據權利要求1所述的以大孔陰離子樹脂為填充料的果糖基轉移酶的初純化方法，其特征在于：所用NaCl溶液梯度為0-1mol/mL。