[發明專利]地衣芽孢桿菌及用其制備凝乳酶凍干粉的方法

無效

• 申請號: 201110249063.7
• 申請日: 2011-08-26
• 公開（公告）號: CN102296042A
• 公開（公告）日: 2011-12-28
• 發明（設計）人: 甘伯中;張衛兵;梁琪;米蘭;喬海軍;張炎
• 申請（專利權）人: 甘肅農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/64;C12R1/10
• 代理公司: 甘肅省知識產權事務中心 62100
• 代理人: 張克勤

1.一種地衣芽孢桿菌D3.11?CGMCC?No：3289，具有產凝乳酶的能力。

2.用權利要求1的地衣芽孢桿菌制備凝乳酶凍干粉的方法，其特征在于該制備方法為下列步驟：

（1）種子液制備

將地衣芽孢桿菌D3.11接種于液體發酵培養基中，在溫度37?℃，轉速140?r/min?搖床培養24小時，得到種子液；

（2）發酵液制備

將種子液按3%的接種量，加入液體發酵培養基中，在溫度37℃、轉速200～240r/min振蕩培養72小時，得到發酵液為凝乳酶液；

步驟（1）、（2）中液體發酵培養基的制法如下：

將麩皮按每10?g麩皮加入100?mL自來水的比例加水后煮沸10?min，過濾后用自來水補足原體積，得到麩皮汁；將所得的麩皮汁，在溫度115℃滅菌20min，室溫下冷卻至30℃作為液體發酵培養基；

（3）發酵液的離心

將發酵液在溫度4℃、轉速8000r/min條件下離心10min，得到上清液；

（4）酶的分級沉淀

將硫酸銨烘干研細，取第三步得到的上清液，向其中緩慢加入硫酸銨粉末至其飽和度達到30%，在溫度4℃靜置2小時后，以7000轉/分鐘離心10min，取上清液，繼續加入硫酸銨粉末至其飽和度達到70%，在溫度?4℃靜置2小時后，以8000轉/分鐘離心10min后，沉淀溶于0.01moI/L,?pH6.8的磷酸鹽緩沖液中，再在溫度?4℃透析48小時，即為透析液；

（5）酶的純化

???將透析液加入DEAE-Sephadex?A-25離子交換柱，以0.05mo1/L,?pH?6.2的磷酸鹽緩沖液為起始緩沖液，采用NaCI梯度洗脫，分布收集，檢測活性，合并有活性的洗脫液，濃縮凍干即可。