[發(fā)明專利]日本血吸蟲Ago蛋白、基因、小RNA及其用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110247554.8
• 申請日: 2011-08-25
• 公開（公告）號: CN102329386A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發(fā)明（設計）人: 程國鋒;羅榮
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N5/10;C12N15/113;C07K16/18;A61K38/17;A61K48/00;A61P33/12;C12Q1/68
• 代理公司: 上海天翔知識產(chǎn)權代理有限公司 31224
• 代理人: 呂伴

技術領域

本發(fā)明屬于基因工程技術領域，具體涉及日本血吸蟲Ago蛋白、基因及其小RNA及其用途。

背景資料

血吸蟲病由血吸蟲感染引起，包括日本血吸蟲(Schistosoma?japonicum)，曼氏血吸蟲(Schistosoma?mansoni)和埃及血吸蟲(Schistosoma?haematobium)，在世界上有76個國家和地區(qū)遭受危害，受感染者約1.5億。在我國流行的是日本血吸蟲。血吸蟲病的流行給人民身體健康和經(jīng)濟發(fā)展造成了巨大的損失。因此，防治血吸蟲病、開發(fā)研制治療血吸蟲病和抗血吸蟲的藥物具有巨大的社會和經(jīng)濟效益。

研制新的治療血吸蟲病和抗血吸蟲的藥物，首先必須找到合適的藥物作用靶位。近十余年，研究表明小編碼RNA，包括siRNA(small?interfering?RNA)、miRNA(microRNA)和piRNA(piwi?interacting?RNA)，在生物體生長發(fā)育過程中起著重要的調控作用。隨著對小編碼RNA研究的不斷深入，越來越多與之相互作用的蛋白也開始引起人們的關注。Argonaute(Ago)蛋白是其中重要一員，它通過與小編碼RNA選擇性結合，在生物體生長發(fā)育過程中發(fā)揮著重要作用。Ago蛋白是約100kD的堿性蛋白家族，其成員通常含PAZ(PIWI-Argonaute-Zwillle)和PIWI兩個結構域，因此，通常將Ago蛋白分成PAZ和PIWI兩個亞家族。大多數(shù)生物都有多種Ago家族蛋白，不同的Ago通常具有不同的功能。目前，未見有關日本血吸蟲Ago蛋白的研究報道，但利用體外合成的小干擾RNA分子可成功將血吸蟲蟲體體內基因敲降，并在血吸蟲不同發(fā)育時期表達一系列非編碼小RNA分子，{可引用下述參考文獻：In?vitro?and?in?vivo?evaluation?of?small?interference?RNA-mediated?gynaecophoral?canal?protein?silencing?in?Schistosoma?japonicum.Cheng?G，F(xiàn)u?Z，Lin?J，Shi?Y，Zhou?Y，Jin?Y，Cai?Y.J?Gene?Med.2009May；11(5)：412-21}.提示Ago蛋白在血吸蟲的生長發(fā)育中可能發(fā)揮著重要作用。

發(fā)明內容

本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一類日本血吸蟲Ago基因、蛋白及小RNA及其用途。

為此，一方面，本發(fā)明公開了一類日本血吸蟲Ago蛋白，為如下(a)或(b)的蛋白質：

(a)其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1～3所示的蛋白質中之一；

(b)在(a)中的氨基酸序列經(jīng)過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸或修飾且具有抗細胞凋亡活性的由(a)衍生的蛋白質中之一。

另一方面，本發(fā)明還公開了一種編碼本發(fā)明所述日本血吸蟲Ago蛋白的基因。

在一實施例里，所述基因為SEQ?ID?NO.4～6所示核酸序列中之一。

另一方面，本發(fā)明還公開了一種包含上述基因的重組表達載體。

在一些實施方式中，所述重組表達載體可為原核表達載體或真核表達載體，其中優(yōu)選真核表達載體。

另一方面，本發(fā)明還公開了一種包含本發(fā)明所述重組表達載體的轉化體。

另一方面，本發(fā)明公開了一種日本血吸蟲小RNA分子，分別具有如下特征：

(a)具有SEQ?ID?NO.7-15所示核酸序列中之一；或

(b)由(a)的小RNA分子發(fā)生一個或幾個核酸置換、缺失或插入而形成的具有(a)相同種子序列的小RNA分子。

所述種子序列通常為物種間非常保守的2-6核苷酸，一般位于小RNA的第2-8位。

較佳地，所述小RNA分子的核酸序列為SEQ?ID?NO.7～15所示核酸序列中之一。

另一方面，本發(fā)明公開了一種編碼上述小RNA分子的基因，為SEQ?IDNO.16-25所示的核苷酸序列中之一；或與SEQ?ID?NO.16-25所示的核苷酸序列中每條序列的互補序列中之一；或與SEQ?ID?NO.16-25所示的核苷酸序列中每條序列有至少70％同源性、且編碼相同小RNA分子序列中之一；

較佳地，所述基因是具有SEQ?ID?NO.16-25所示的核酸序列。

另一方面，本發(fā)明還提供了一種特異性識別日本血吸蟲Ago蛋白的抗體，其特征在于所述抗體的免疫原為本發(fā)明上述蛋白。