[發(fā)明專利]早期乳腺癌血清診斷試劑及其檢測方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110245811.4
• 申請(qǐng)日: 2011-08-24
• 公開（公告）號(hào): CN102393457A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董學(xué)君;李志國
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 紹興市人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574
• 代理公司: 紹興市越興專利事務(wù)所 33220
• 代理人: 方劍宏

1.早期乳腺癌血清診斷試劑，其特征在于：所述診斷試劑以hnRNPF，或者h(yuǎn)nRNPF聯(lián)合FTH1為診斷標(biāo)志物，可檢測分離的待測血清中hnRNPF抗體，或者h(yuǎn)nRNPF與FTH1的對(duì)應(yīng)抗體，用于乳腺癌早期診斷或術(shù)后療效監(jiān)測。

2.早期乳腺癌血清診斷試劑，其特征在于：包括hnRNPF?ELISA板，該hnRNPF?ELISA板先由應(yīng)用乳腺癌T7噬菌體特異表達(dá)的hnRNPF抗原或商業(yè)化購得的hnRNPF抗原包埋酶標(biāo)板，4℃過夜，洗滌后?5％BSA/PBS室溫封閉2?小時(shí)形成；還包括可配合hnRNPF?ELISA板對(duì)待測血清進(jìn)行檢測的HRP偶聯(lián)的山羊抗人IgG、顯色劑A、B和終止液；hnRNPF?ELISA板可由酶標(biāo)儀于450?nm波長處讀取OD值，以先后經(jīng)噬菌體、鼠抗噬菌體一抗和羊抗鼠HRP二抗包被的加樣孔作為陰性對(duì)照孔，以未包被噬菌體的加樣孔作為空白對(duì)照孔；用空白對(duì)照孔調(diào)零后，根據(jù)hnRNPF?ELISA板待測血清OD值/陰性對(duì)照平均OD值的比值進(jìn)行判斷，比值≥2.0，判斷為陽性，比值＜2.0，判斷為陰性，陰性對(duì)照OD值低于0.05作0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。

3.如權(quán)利要求2所述的早期乳腺癌血清診斷試劑，其特征在于：還包括FTH1?ELISA板，該FTH1?ELISA板先由應(yīng)用乳腺癌T7噬菌體特異表達(dá)的FTH1抗原或商業(yè)化購得的FTH1抗原包埋酶標(biāo)板，4℃過夜，洗滌后?5％BSA/PBS室溫封閉2?小時(shí)形成；還包括可配合FTH1?ELISA板對(duì)待測血清進(jìn)行檢測的HRP偶聯(lián)的山羊抗人IgG、顯色劑A、B和終止液；FTH1?ELISA板可由酶標(biāo)儀于450?nm波長處讀取OD值，以先后經(jīng)噬菌體、鼠抗噬菌體一抗和羊抗鼠HRP二抗包被的加樣孔作為陰性對(duì)照孔，以未包被噬菌體的加樣孔作為空白對(duì)照孔；用空白對(duì)照孔調(diào)零后，根據(jù)FTH1?ELISA板待測血清OD值/陰性對(duì)照平均OD值的比值，結(jié)合hnRNPF?ELISA板待測血清OD值/陰性對(duì)照平均OD值的比值，進(jìn)行判斷，陰性對(duì)照OD值低于0.05作0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。

4.一種進(jìn)行乳腺癌早期診斷或術(shù)后療效監(jiān)測的方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）配液：應(yīng)用乳腺癌T7噬菌體特異表達(dá)hnRNPF抗原制成T7?噬菌體液，或者直接商業(yè)化購買hnRNPF抗原液，或者直接商業(yè)化購買hnRNPF抗原粉制成hnRNPF抗原液；

（2）hnRNPF?ELISA板的制備：?將T7?噬菌體液或hnRNPF抗原液包被于酶標(biāo)板，4℃過夜；經(jīng)洗滌后，5％BSA/PBS室溫封閉2?小時(shí)；

（3）標(biāo)本收集和處理：抽待測外周血，分離待測血清；

（4）hnRNPF?ELISA板的檢測：在酶標(biāo)板的每孔中加入1:100稀釋的待測血清室溫孵育1?小時(shí)；洗滌后加入1:10?000稀釋的HRP偶聯(lián)的山羊抗人IgG，室溫放置1?小時(shí)；洗滌后加入顯色劑A、B各1滴，37℃孵育15?分鐘，立即加入終止液；

（5）讀板：在酶標(biāo)儀下450?nm波長處讀取OD值；

（6）根據(jù)OD值的陰性、陽性判斷結(jié)果：以先后經(jīng)噬菌體、鼠抗噬菌體一抗和羊抗鼠HRP二抗包被的加樣孔作為陰性對(duì)照孔，以未包被噬菌體的加樣孔作為空白對(duì)照孔；用空白對(duì)照孔調(diào)零后，根據(jù)hnRNPF?ELISA板待測血清OD值/陰性對(duì)照平均OD值的比值進(jìn)行判斷，比值≥2.0，判斷為陽性，比值＜2.0，判斷為陰性，陰性對(duì)照OD值低于0.05作0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。