[發明專利]一株能將奎寧酮轉化為(S)-3-奎寧醇的紅串紅球菌及轉化方法

有效

• 申請號: 201110244644.1
• 申請日: 2011-08-25
• 公開（公告）號: CN102952760A
• 公開（公告）日: 2013-03-06
• 發明（設計）人: 王玉;李建煚;吳洽慶;朱敦明
• 申請（專利權）人: 天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/18;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.紅串紅球菌Rhodococcus?erythropolis?WY1406，保藏單位為中國普通微生物菌種保藏中心，保藏編號為CGMCC?No.5096。

2.由權利要求1所述菌株能轉化奎寧酮為(S)-3-奎寧醇。

3.權利要求1所述菌株的發酵培養方法，其包括步驟：

1)種子培養

將紅串紅球菌Rhodococcus?erythropolis?WY1406接入滅菌后的種子液體培養基中，于30℃，200～250r/min培養20～36h，得到種子液，

液體培養基的配制如下：葡萄糖10～20g/L，蛋白胨5g/L，酵母提取物5g/L，氯化鈉1g/L，pH為7.0；

2)發酵培養

將步驟(1)得到的種子液體按接種量1～5％接種到發酵培養基中進行發酵培養。培養條件：30℃，搖床轉速200～250r/min，發酵時間24～36h，即得到紅串紅球菌的發酵液，

所述發酵培養基的成分為：蔗糖15～20g/L，酵母提取物7g/L，蛋白胨3g/L，磷酸二氫鉀1g/L，磷酸氫二鉀1g/L，硫酸鎂0.5g/L，氯化鈉1g/L，pH為7.0。

4.一種制備權利要求2所述的(S)-3-奎寧醇的方法，其包括如下步驟：

1)收集菌體：發酵培養權利要求1所述的菌株，得到發酵液，離心收集菌體，得到濕菌體；

2)轉化反應：用磷酸氫二鉀-磷酸二氫鉀緩沖液洗滌濕菌體后重新懸浮于同一緩沖液中，再加入底物奎寧酮鹽酸鹽，添加葡萄糖，在20-60℃搖床上反應，反應10-48h后，停止反應；

3)分離純化(S)-(+)-3-奎寧醇產品

反應液離心分離，上清液用無機堿調節pH值到9-14，然后減壓旋蒸，得到的殘留物用二氯甲烷等有機溶劑固液萃取，濾液旋干得部分(S)-3-奎寧醇產品，濾餅溶于二氯甲烷等有機溶劑中攪拌半小時后過濾，濾液旋干得到粗產品，再用丙酮等有機溶劑重結晶得另一部分(S)-3-奎寧醇產品。

5.本領域技術人員可以根據本發明作出各種改變或變形，只要不脫離本發明的技術思想，均屬于本發明權利要求所定義的范圍。