[發明專利]16個基因座快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201110243734.9
• 申請日: 2011-08-24
• 公開（公告）號: CN102424834A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發明（設計）人: 鄭衛國;周懷谷;夏子芳;陶莉;楊輝;杜蔚安;倪崢飛
• 申請（專利權）人: 無錫中德美聯生物技術有限公司;上海市公安局物證鑒定中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌

技術領域

本發明涉及一種檢測人類基因組DNA中多個STR基因座的試劑盒，具體涉及一種檢測15個STR基因座和1個性別鑒定基因座的快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒，屬于生物檢測技術領域。

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背景技術

短串聯重復序列基因座（STR）是目前普遍應用的遺傳標記。90年代初STR基因座多態性的發現，特別是由于STR基因座的片段小、容易擴增，適宜于檢驗微量和降解檢材，而且各基因座的擴增條件相似而能夠復合擴增，因而具有靈敏、準確、快速、信息量大等優點。尤其是在建立DNA數據庫方面，STR復合擴增技術具有極大的優越性，因此法醫學界以及一些大的公司均投入大量的資金對其進行了開發性的研究。90年代中后期以美國ABI公司為代表的研發商建立起了熒光復合擴增體系。目前最具代表性的是ABI（Applied?Biosystems,?USA）公司的Identifiler^TM和Promega（USA）公司的PowerPlex-16熒光檢測試劑盒。

法醫DNA分析就是利用DNA分型技術，確定現場法醫物證的DNA基因型，并應用同樣技術確定犯罪嫌疑人的DNA基因型，通過兩者的比對，從而認定犯罪事實或排除犯罪嫌疑。隨著法醫DNA分型技術的發展，目前已經能對類似血痕、精斑、唾液斑、毛發、骨骼等進行DNA分型，達到認定水平，成為刑事技術中科技含量最高、實用性最強的方法之一，檢驗結果得到了司法機關特別是審判機關的普遍采信，DNA分型技術成為刑事偵查和法庭審判的最重要依據之一。

目前的STR分型技術，往往包括樣本檢材的DNA提取、PCR擴增和分型檢測三項主要操作步驟，獲得一個樣本的最終分型結果往往需要8個小時以上。縮短樣本DNA檢驗時間，在實際檢案中將有利于快速鎖定犯罪嫌疑人，或排除無辜人員，在案件偵破過程中具有重要意義，已經成為科研攻關的一個新的重點，是法庭科學DNA分型技術發展的必然方向。

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發明內容

本發明實施例的目的是針對上述現有技術的缺陷，提供了一種能夠縮短獲得樣本最終分型結果時間的16基因座快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒。

為了實現上述目，采取的技術方案：

一種16個基因座快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：PCR緩沖液、MgCl₂、dNTPs和牛血清蛋白的混合物，熱啟動快速Taq酶，16對引物混合物以及超純水；

其中16對引物混合物為：

，上述16對引物中每對中至少有一個5’端被熒光標記。

所述的16個基因座分為4組，并其對應的引物對分別用4種不同的顏色的熒光染料進行標記，所述的四種熒光染料為藍色熒光染料6-FAM、綠色熒光染料HEX；黃色熒光染料TAMRA、紅色熒光染料標記?ROX；內標選用橙色熒光SIZ。

所述的16個基因座分為4組，并其對應的引物分別用4中不同的顏色的熒光染料進行標記，分組方式為：?Amelogenin、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539和D6S1043為一組，采用藍色熒光染料標記，熒光標記物為6-FAM；TPOX、TH01、D2S1338和CSF1PO為一組，采用綠色熒光染料標記，熒光標記物為HEX；vWA、D5S818和FGA為一組，采用黃色熒光染料標記，熒光標記物為TAMRA；D8S1179、D21S11和D18S51為一組，采用紅色熒光染料標記，熒光標記物為ROX；內標選用橙色熒光標記，熒光標記物為SIZ。

使用所述的試劑盒為PCR緩沖液的pH值為8.0-9.0，鎂離子濃度為1.5-3.5mM，4種dNTP的終濃度各為200-300μM，牛血清蛋白在所述PCR擴增體系中的終濃度為0.1-1mg/ml，以及熱啟動快速Taq酶的用量為0.1-0.4U/μL，16對引物混合物中的單對引物終濃度為

一種16個基因座快速復合PCR擴增熒光檢測試劑盒的應用，其特征在于其用于DNA分型。

具體來說：