[發明專利]一種利用線粒體內膜表達變形紫色紅質篩選淬滅自由基的活性物質和抗衰老產品的方法

無效

• 申請號: 201110242410.3
• 申請日: 2011-08-23
• 公開（公告）號: CN102952796A
• 公開（公告）日: 2013-03-06
• 發明（設計）人: 宋青;姚文清;李芳;張雯景;王丹陽;周陸軍;柯翰中;張懷
• 申請（專利權）人: 北京科技大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/63;C12N5/10;C12Q1/02;C07K14/00;G01N33/68;A61K31/375;A61K31/05;A61P39/06;A61P25/28;A23L1/30
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1.在體外培養的動物細胞內表達變形紫色紅質，使其定位在線粒體內膜上。在光照條件下培養上述細胞，并且在培養基中加入待測物質，檢測該物質抑制細胞凋亡的效果和活性。

2.權限1中的動物細胞是原代細胞或細胞株，包括人胚腎細胞株HEK293。

3.權限1中變形紫色紅質的人造基因是

5‘-G

GGG?AAT?TCG?CGG?CCG?CTT?CTA?GAG?TAA?ACC?ACC?ATG?CTT?GCC?ACT?AGG?GTG?TTC?AGT?CTG?GTC

GGG?AAA?CGG?GCA?ATT?TCT?ACC?AGC?GTC?TGT?GTG?AGA?GCC?GGC?GGA?GGC?GAT?TTG?GAC?GCT?TCT

GAT?TAT?ACA?GGA?GTG?AGT?TTT?TGG?TTG?GTC?ACC?GCA?GCT?CTT?TTG?GCG?TCG?ACA?GTG?TTT?TTC

TTT?GTG?GAG?AGG?GAC?CGC?GTA?TCA?GCA?AAA?TGG?AAG?ACC?TCC?TTG?ACT?GTT?AGT?GGC?CTC?GTC

ACA?GGA?ATA?GCT?TTT?TGG?CAC?TAT?ATG?TAC?ATG?AGG?GGC?GTT?TGG?ATC?GAA?ACG?GGA?GAT?TCC

CCC?ACA?GTT?TTT?AGG?TAT?ATC?GAC?TGG?CTC?CTT?ACT?GTC?CCC?TTG?CTG?ATT?TGT?GAG?TTC?TAT

TTG?ATC?TTA?GCC?GCT?GCA?ACC?AAT?GTG?GCT?GGA?TCA?CTG?TTC?AAG?AAA?TTG?TTG?GTG?GGG?TCC

TTA?GTG?ATG?TTG?GTG?TTC?GGT?TAC?ATG?GGC?GAA?GCT?GGA?ATC?ATG?GCA?GCC?TGG?CCA?GCC?TTT

ATT?ATC?GGC?TGC?CTC?GCC?TGG?GTA?TAT?ATG?ATA?TAC?GAG?CTC?TGG?GCA?GGC?GAA?GGA?AAG?AGT

GCT?TGC?AAC?ACA?GCT?AGC?CCT?GCG?GTC?CAG?TCG?GCC?TAC?AAC?ACA?ATG?ATG?TAT?ATT?ATC?ATC

TTC?GGC?TGG?GCG?ATA?TAT?CCT?GTG?GGC?TAC?TTC?ACC?GGT?TAC?TTG?ATG?GGC?GAC?GGG?GGA?AGT

GCG?CTT?AAT?TTA?AAC?CTT?ATT?TAT?AAC?CTC?GCC?GAT?TTC?GTG?AAC?AAA?ATT?TTA?TTT?GGC?CTG

ATT?ATC?TGG?AAC?GTC?GCT?GTC?AAA?GAA?TCA?AGC?AAC?GCC?TAA?TAG?TGA?GGA?TCC?ACT?AGT?AA-3‘。

4.權限1中表達變形紫色紅質基因的方式是將該基因克隆入表達載體質粒，比如pSG5質粒，或BABE反轉錄表達質粒，然后使用轉染方法，比如脂質體介導的方法導入細胞。如使用反轉錄載體，可以篩選整合該基因和帶抗性基因的細胞克隆。該基因可以在細胞內短時間或長時間表達。

5.權限1中光照條件為可見光，光強范圍1-5000lux。最適光強范圍25-1000lux。

6.權限1中光照時間為12小時至14天。最適光照時間為24小時至7天。

7.權限1中待測化合物是天然產物或合成化合物。使用權限1篩出的陽性物質包括維生素C，叔丁基對苯二酚(TBHQ)。

8.使用權限1篩選出的陽性物質，可以用于抗衰老和治療衰老引起的疾病，包括神經退行性疾病。?