[發明專利]一種從低溫乙醇法組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中回收白蛋白的方法

有效

• 申請號: 201110240071.5
• 申請日: 2011-08-22
• 公開（公告）號: CN102311496A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 張林;張衛柱;張華平;張云;郭軍峰
• 申請（專利權）人: 西安回天血液制品有限責任公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務所有限公司 61114
• 代理人: 李罡

技術領域

本發明屬于血液制品技術領域，涉及一種從低溫乙醇法組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中提取回收白蛋白的方法。

背景技術

從血漿中提取白蛋白的分離提取工藝目前國內外主要采用基于Cohn6法的低溫乙醇法來進行，該方法是根據血漿蛋白理化性質的差別，加入不同濃度的鹽、有機溶劑和酸堿，通過改變影響蛋白質穩定性的條件而分別沉淀提取出不同的蛋白質。

在低溫乙醇法中影響蛋白質沉淀反應的因素主要有5個，即pH值、溫度、蛋白濃度、離子強度、乙醇濃度。通過控制這些參數可以逐級沉淀血漿中的不同蛋白質成份，一般先從血漿中沉淀出組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ，然后沉淀出組份Ⅳ，最終從組份Ⅴ中獲得白蛋白制品。

然而分級沉淀過程中往往伴隨著白蛋白的大量損失，一般夾雜白蛋白最多的是組份Ⅳ沉淀，同時組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中也含有部分白蛋白，因此從組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ中回收白蛋白是提高白蛋白提取率的重要措施，現有技術中一般采用改變沉淀條件并結合柱層析的方法，但是，該傳統回收方法存在層析柱的處理量小、離心分離固液設備投資較大和能耗較高的缺點。在提取過程中對該組份只針對丙種球蛋白進行進行了提取，但在FⅡ上清中仍然含有較多的白蛋白，影響了提取效率。

發明內容

本發明的目的是提供一種用低溫乙醇法從組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中回收白蛋白的生產工藝，解決了現有技術中存在的白蛋白提取率不高的問題。

本發明所采用的技術方案是：

（1）F1上清液的制備

用5～6倍體積的注射用水溶解組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，在1～5℃下攪拌3～5小時令其完全溶解后，加入磷酸二氫鈉至0.01mol/L，之后再用0.2?mol/L的氫氧化鈉調節pH值至5.00±0.05，緩慢加入體積分數為95%的乙醇令溶液中乙醇體積濃度達到7.5～8.5%，并控制溶液溫度在-2.5～-2℃之間，使其產生F1沉淀；待F1沉淀產生完全后加入珍珠巖至3.0±0.2g/L，硅藻土3.0±0.2g/L，繼續攪拌使液體呈漿狀，壓濾分離出體系中產生的FⅠ沉淀，得FⅠ上清液；

（2）FⅢ上清液的制備

將上步FⅠ上清液移入潔凈的不銹鋼反應罐中，加入0.2?mol/L的氫氧化鈉調節pH值至5.15±0.05，繼續添加乙醇至體積濃度13.5～14.5%，控制液體溫度在-4～-3.5℃使其產生FⅢ沉淀；待FⅢ沉淀產生完全后加入珍珠巖至3.0±0.2g/L，硅藻土3.0±0.2g/L，繼續攪拌使液體呈漿狀；在2.0～2.8bar壓力下過濾分離出體系中產生的FⅢ沉淀，得FⅢ上清液；

（3）粗白蛋白溶液的制備

將FⅢ上清液移入潔凈的不銹鋼反應罐中，加入0.2?mol/L的氫氧化鈉調節pH值至6.9～7.0，加入氯化鈉至濃度5.0±0.2g/L，緩慢添加乙醇至體積濃度17.5～18.5%，控制體系溫度在-5.0±0.1℃，產生FⅡ沉淀，向液體中添加珍珠巖至1.0±0.2g/L，經壓濾分離出FⅡ沉淀，FⅡ上清濾過液經超濾濃縮至蛋白質濃度≥18%，得到粗白蛋白溶液；

（4）FⅢ沉淀白蛋白的提取

將第（2）步的FⅢ沉淀用800～1000升溫度在5℃以下的注射用水溶解，攪拌令其完全溶解后加入氯化鈉至8～9g/L和枸櫞酸鈉至2～3g/L；將該溶液與第（4）步的粗白蛋白溶液混合，繼續添加氯化鈉至7±0.5g/L，枸櫞酸鈉4±0.5g/L；用0.2?mol/L的氫氧化鈉調節pH至5.25±0.05，緩慢添加體積分數為95%的乙醇至體積濃度20%，同時降溫至-4.5±0.5℃，壓濾去除FⅢ沉淀，保留FⅢ上清濾液；

（5）Ⅴ沉淀的制備

用0.2?mol/L的氫氧化鈉調節FⅢ上清至pH6.3±0.1，保持溫度在-4.5±0.5℃，緩慢添加乙醇至乙醇濃度38%；

壓濾后得FⅢ-1上清濾液，調節pH至5.75±0.05，降溫至-5.5±0.5℃，并添加乙醇至濃度40%；

再次壓濾后得FⅢ-2上清濾液，調節pH至4.80±0.05，繼續降溫至-8.0±0.1℃，壓濾后獲得組份Ⅴ沉淀；

（6）蛋白質溶液除雜

將組份Ⅴ沉淀用6～7倍體積的注射用水溶解，調pH4.6±0.1，保持溫度在-3～-2℃，緩慢添加乙醇至體積濃度12～14%，將溶液經深層過濾去除雜質；調節濾過液pH值至5.20±0.05，經離子交換層析去除溶液中的雜蛋白；流出液用1mol/L的碳酸氫鈉調節pH7.1±0.1，添加氯化鈉至9±0.1g/L；得蛋白質溶液；

（7）制備白蛋白制品