[發(fā)明專利]抗體片段修飾的微梁制備方法和基于抗體片段修飾的微梁免疫傳感檢測(cè)系統(tǒng)在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201110238882.1 | 申請(qǐng)日： | 2011-08-19 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN102951598A | 公開（公告）日： | 2013-03-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張青川;吳尚犬;鄔林;伍小平 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | B81C1/00 | 分類號(hào)： | B81C1/00;B81B3/00;G01L1/04;G01N33/543 |
| 代理公司： | 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021 | 代理人： | 王旭 |
| 地址： | 230026*** | 國(guó)省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 抗體 片段 修飾 制備 方法 基于 免疫 傳感 檢測(cè) 系統(tǒng) | ||
1.一種制備微懸臂梁的方法，包括以下步驟：
1)提供抗體和帶有鍍金層的微懸臂梁；
2)二硫鍵還原步驟：使用二硫鍵還原劑處理所述抗體，使得所述抗體鉸鏈區(qū)的二硫鍵還原成巰基，從而得到兩個(gè)對(duì)稱的帶有巰基的半抗體片段；
3)固定步驟：將步驟2)獲得的半抗體片段與鍍有金層的微懸臂梁結(jié)合，得到鍍金表面上固定有所述半抗體片段的微懸臂梁。
2.一種制備微懸臂梁的方法，包括以下步驟：
1)提供抗體和帶有鍍金層的微懸臂梁；
2)酶解步驟：用蛋白酶將所述抗體裂解成F(ab’)2片段和多個(gè)小分子片段，所述蛋白酶選自胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或其組合；
3)二硫鍵還原步驟：使用二硫鍵還原劑處理所述F(ab’)2片段，使得所述抗體鉸鏈區(qū)的二硫鍵還原成巰基，從而得到兩個(gè)對(duì)稱的帶有巰基的Fab’片段；
4)固定步驟：將步驟3)獲得的Fab’片段與鍍有金層的微懸臂梁結(jié)合，得到鍍金表面上固定有所述Fab’片段的微懸臂梁。
3.一種制備微懸臂梁的方法，包括以下步驟：
1)提供抗體和帶有鍍金層的微懸臂梁；
2)二硫鍵還原步驟：使用二硫鍵還原劑處理所抗體，使得所述抗體鉸鏈區(qū)的二硫鍵還原成巰基，從而得到兩個(gè)對(duì)稱的帶有巰基的半抗體片段；
3)酶解步驟：用蛋白酶將所述半抗體片段裂解成Fab’片段和多個(gè)小分子片段，所述蛋白酶選自胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或其組合；
4)固定步驟：將步驟3)獲得的Fab’片段與鍍有金層的微懸臂梁結(jié)合，得到鍍金層上固定有所述Fab’片段的微懸臂梁。
4.一種應(yīng)力傳感元件，其包括基于應(yīng)力的微懸臂梁，所述微懸臂梁的鍍金層上固定有抗體的半抗體片段或Fab’片段。
5.一種基于應(yīng)力的微懸臂梁免疫傳感檢測(cè)系統(tǒng)，其包括權(quán)利要求4的應(yīng)力傳感元件。
6.一種使用微懸臂梁傳感檢測(cè)系統(tǒng)免疫傳感檢測(cè)待測(cè)樣品的方法，包括以下步驟：
1)提供對(duì)靶抗原特異的抗體和微懸臂梁傳感檢測(cè)系統(tǒng)，所述微懸臂梁傳感檢測(cè)系統(tǒng)包括反應(yīng)池和帶有鍍金層的基于應(yīng)力的微懸臂梁；
2)使用二硫鍵還原劑處理所述抗體，使得所述抗體鉸鏈區(qū)的二硫鍵還原成巰基，從而得到兩個(gè)對(duì)稱的帶有巰基的半抗體片段；
3)將步驟2)獲得的半抗體片段與鍍有金層的微懸臂梁結(jié)合，得到鍍金層上固定有所述半抗體片段的微懸臂梁；
4)將步驟3)獲得的固定有所述半抗體片段的微懸臂梁固定到微懸臂梁傳感檢測(cè)系統(tǒng)的反應(yīng)池中；
5)將待測(cè)樣品加入至步驟4)獲得的微懸臂梁傳感檢測(cè)系統(tǒng)中，檢測(cè)待測(cè)樣品中是否存在所述靶抗原。
7.一種使用微懸臂梁傳感檢測(cè)系統(tǒng)免疫傳感檢測(cè)待測(cè)樣品的方法，包括以下步驟：
1)提供對(duì)靶抗原特異的抗體和微懸臂梁傳感檢測(cè)系統(tǒng)，所述微懸臂梁傳感檢測(cè)系統(tǒng)包括反應(yīng)池和帶有鍍金層的基于應(yīng)力的微懸臂梁；
2)用蛋白酶將所述抗體裂解成F(ab’)2片段和多個(gè)小分子片段，所述蛋白酶選自胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或其組合；
3)使用二硫鍵還原劑處理所述F(ab’)2片段，使得所述抗體鉸鏈區(qū)的二硫鍵還原成巰基，從而得到兩個(gè)對(duì)稱的帶有巰基的Fab’片段；
4)將步驟3)獲得的Fab’片段與鍍有金層的微懸臂梁結(jié)合，得到鍍金層上固定有所述Fab’片段的微懸臂梁；
5)將步驟4)獲得的固定有所述Fab’片段的微懸臂梁固定到微懸臂梁傳感檢測(cè)系統(tǒng)的反應(yīng)池中；
6)將待測(cè)樣品加入至步驟5)獲得的微懸臂梁傳感檢測(cè)系統(tǒng)中，檢測(cè)待測(cè)樣品中是否存在所述靶抗原。
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