[發明專利]一種室內檢測雜交玉米種子純度的方法

無效

• 申請號: 201110236888.5
• 申請日: 2011-08-18
• 公開（公告）號: CN102401812A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 文江蓉
• 申請（專利權）人: 新疆康地種業科技股份有限公司
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

發明領域

本發明涉及玉米種子檢測的技術領域。具體的說，本發明涉及一種室內檢測雜交玉米種子純度的技術領域。

背景技術

利用玉米鹽溶蛋白電泳法測定雜交玉米種子純度的方法已經在全國各地得到廣泛應用，取得了較好的經濟和社會效應，但是，目前普遍存在的試驗過程比較繁瑣，對于初學者來說難以快速掌握并得出清晰的譜帶的技術缺陷。在現有技術提供的標準的試驗方法里，濃縮膠和分離膠緩沖液需要在調好PH值后先定容，再用定容好的緩沖液來溶解丙烯酰胺等藥品，然后再定容。在實際操作中試驗人員很容易忘記給兩種緩沖液定容，經常會直接拿未定容的緩沖液來溶解藥品，結果就是前功盡棄，從頭再來。如何簡化或進一步研究一種快速簡易適用于實驗室檢測雜交玉米種子純度的方法具有廣泛的實用性和重要性。

發明內容

針對現有技術目前普遍存在的試驗過程比較繁瑣，對于初學者來說難以快速掌握并得出清晰的譜帶的技術缺陷，本發明旨在一種室內檢測雜交玉米種子純度的方法，該方法在傳統試驗方法的基礎上加以簡化，顯著提高試驗效率，比常規的試驗操作時間節約2-3小時，操作實用簡易，實用特性突顯。

本發明的技術方案：通過配制電極緩沖液、樣品提取液、分離膠緩沖液、分離膠溶液、濃縮膠緩沖液、濃縮膠溶液和催化劑溶液、染色液試劑，制備選用雜交玉米種子的樣品和凝膠制備，通過采用電泳、卸板、染色、洗板，計算電泳測定值，保存膠板，計算出雜交玉米的純度值。本發明采用一個分離膠和濃縮膠溶液配制的簡便又不影響試驗效果的方法，即取分離膠和濃縮膠緩沖液定容的步驟，簡化膠溶液配制程序，緩沖液不定容，待溶解完藥品后將溶液一次性定容，這樣配出來的濃縮膠溶液和分離膠溶液用于試驗絲毫不會影響譜帶的清晰性和完整性，而且配溶液過程減少了兩個定容環節，更易操作。

具體的，本發明提供一種室內檢測雜交玉米種子純度的方法，具體步驟如下：

1.按照常規配制方法，制備電極緩沖液、樣品提取液、催化劑、染色液溶液備用。

2.分離膠溶液：取1.43ml乳酸鈉于1000ml燒杯中，加去離子水900ml，用乳酸調至PH3.0，備用，取消常用的定容步驟；稱取丙烯酰胺112.5g，甲叉雙丙烯酰胺3.75g，抗壞血酸0.25g，硫酸亞鐵8.0mg，用分離膠緩沖液溶解，定容至1000ml，過濾于棕色瓶中，放入4℃冰箱保存。

3.濃縮膠溶液：取0.30乳酸鈉于200ml燒杯中，加去離子水90ml，用乳酸調至PH5.2，備用，取消常用的定容步驟；稱取丙烯酰胺6.00g，甲叉雙丙烯酰胺1.00g，抗壞血酸0.03g，硫酸亞鐵0.8mg，用濃縮膠緩沖液溶解，定容至100ml，貯于棕色瓶中，放入4℃冰箱保存。

4.從送驗樣品中隨機數取玉米種子100粒，用單籽粒粉碎器逐粒粉碎，放入1.5ml離心管中，按體積比1∶1.2的量用滴管加入樣品提取液，搖勻，放置5min后再搖一次，靜置30min后備用，取消了常用的樣品提取液的離心步驟。

5.凝膠的制備：裝槽、封底的操作采用常用的方法；

灌分離膠采用：底縫封住后，吸去因凝膠而析出的水，量取分離膠溶液，加入過氧化氫或過硫酸銨溶液，迅速搖勻；傾斜電泳槽，將分離膠溶液倒入兩玻璃板之間，高度距短玻璃板上沿1.2cm，放平電泳槽并在試驗臺上振動后靜置于桌面10min，取消了常用正丁醇鎮壓分離膠液面的步驟。

灌濃縮膠：量取濃縮膠溶液，加入過氧化氫或過硫酸銨溶液，迅速搖勻，倒入兩玻璃板之間，馬上插好樣品梳，樣品梳底部距分離膠頂部0.5cm。

6.點樣、電泳、卸板、染色的操作采用常用的方法。

通過實施本發明具體的發明內容，可以達到以下技術效果：

1.本發明提供了室內檢測雜交玉米種子純度的簡易方法。在常用的試驗方法里，濃縮膠和分離膠緩沖液需要在調好PH值后先定容，再用定容好的緩沖液來溶解丙烯酰胺等藥品，然后再定容。在實際操作中試驗人員很容易忘記給兩種緩沖液定容，經常會直接拿未定容的緩沖液來溶解藥品，結果就是前功盡棄，從頭再來。采用本發明，緩沖液不定容，待溶解完藥品后將溶液一次性定容，這樣配出來的濃縮膠溶液和分離膠溶液用于試驗絲毫不會影響譜帶的清晰性和完整性，而且配溶液過程減少了兩個定容環節，更易操作，減少試驗時間30min。