[發(fā)明專利]癌胚抗原(CEA)定量測定試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110235584.7
• 申請日: 2011-08-16
• 公開（公告）號: CN102426257A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古科慧生物科技有限責(zé)任公司
• 主分類號: G01N33/96
• 分類號: G01N33/96;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/543;G01N33/535;G01N33/531;G01N21/64
• 代理公司: 北京富天民宏濟(jì)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11272
• 代理人: 劉壽椿;龔雅民

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及測定血清的試劑盒及其測試方法，尤其是涉及測定血清中癌胚抗原(CEA)含量的試劑盒及其測試方法。

背景技術(shù)

癌胚抗原(CEA)是一種分子量為180-200kDa的多糖蛋白復(fù)合物。它存在2～6月齡的胎兒胃腸道組織和直、結(jié)腸癌細(xì)胞組織中，胃癌、胰腺癌、卵巢癌、食道癌等組織中也有存在。通常CEA被認(rèn)為是一種廣譜的腫瘤標(biāo)志物。CEA最常用于消化系統(tǒng)的癌癥，如結(jié)腸、直腸、胃、肝臟和胰腺等器官。此外，還用于乳癌、肺癌和前列腺癌。測定血清中的CEA含量，對惡性消化道腫瘤治療前、后和定期連續(xù)性的動態(tài)含量變化的觀察及判斷預(yù)后具有一定的參考價(jià)值。CEA含量與腫瘤大小、有無轉(zhuǎn)移存在一定關(guān)系，當(dāng)發(fā)生肝轉(zhuǎn)移時(shí)，CEA的升高尤為明顯。此外，CEA輕度增加也見于某些良性消化道疾病如腸梗阻、膽道梗阻、胰腺炎、肝硬化、結(jié)腸息肉、潰瘍性結(jié)腸炎以及吸煙者和老年人。從檢測角度上來說，目前臨床上用于測定CEA的方法主要有放免法、ELISA法、化學(xué)發(fā)光法等。

過去以放免為代表的癌胚抗原(CEA)測定試劑盒受方法學(xué)的限制，其靈敏度和抗干擾能力嚴(yán)重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市場，目前應(yīng)用較多的為酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)和化學(xué)發(fā)光技術(shù)。化學(xué)發(fā)光技術(shù)興起于上個(gè)世紀(jì)80年代是繼酶聯(lián)免疫技術(shù)和放免技術(shù)之后發(fā)展起來的新興技術(shù)，由于其高靈敏度、高特異性，同時(shí)方法簡便、快速，標(biāo)記結(jié)合物穩(wěn)定，無放射性同位素?fù)p傷和污染等特點(diǎn)，在近些年得到了飛速發(fā)展。

磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)是一種以磁性微粒為固相分離載體，將免疫磁微粒分離技術(shù)與酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)相結(jié)合而建立的一種新型免疫檢測方法。傳統(tǒng)ELISA方法，抗原、抗體的結(jié)合反應(yīng)是在固相(ELISA板反應(yīng)孔)表面進(jìn)行的，而磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測方法，抗原、抗體的結(jié)合反應(yīng)也在近似液相的條件下進(jìn)行，因而反應(yīng)快速、徹底。與傳統(tǒng)ELISA相比具有靈敏度高，檢測用時(shí)少的優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題在于提供一種癌胚抗原(CEA)定量測定試劑盒及其檢測方法，采用該試劑盒進(jìn)行CEA檢測具有較高的靈敏度和特異性，和更短的獲得檢測結(jié)果的時(shí)間和更簡便的操作方式。

本發(fā)明提供了一種癌胚抗原(CEA)的定量測定試劑盒，其包含的試劑有CEA磁分離試劑，酶反應(yīng)物，反應(yīng)增強(qiáng)劑，稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。

所述的磁分離試劑含有標(biāo)記有抗CEA單克隆抗體的磁性微球。

所述的酶反應(yīng)物是含有堿性磷酸酶標(biāo)記的抗CEA單克隆抗體。

所述的反應(yīng)增強(qiáng)劑是含有Tris的緩沖液。

所述稀釋液是含有BSA溶液。

所述的標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品是含有一定量的CEA抗原的BSA蛋白溶液。

所述清洗液濃縮液是含有TWEEN-20和Proclin-300的緩沖液。

所述的底物溶液為酶促化學(xué)發(fā)光底物溶液。

本發(fā)明癌胚抗原(CEA)的定量測定試劑盒的制備方法，包括下述步驟：

第一步：磁分離試劑的制備過程

一、磁珠緩沖液配制操作步驟，配制1L：

1、稱取TRIS?4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，稱取0.96g?TWEEN-20于20ml容器中加適量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；

2、用移液器將Proclin-300量取0.2ml于10ml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中，然后在上述1L容器中加入800ml純化水，充分?jǐn)嚢瑁?/p>

3、調(diào)節(jié)PH計(jì)測量其PH值，調(diào)PH，控制PH在7.95-8.05之間；

4、稱取BSA?3g倒入上述1L容器中；

5、最后定容至1000ml，用0.2um濾器過濾；過濾完后貼好標(biāo)簽于2-8℃冷庫貯存。

二、磁分離試劑的制備過程

1、將1.0mg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul?DMSO中，取2mg抗CEA單克隆抗體溶于PH?9.5的0.1mol/L?PB緩沖液中至總體積為1ml；

2、確定辛二酸二琥珀酰亞胺酯的投入量，用移液槍吸取辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中，置室溫90min；

3、將步驟2抗體溶液加入到Centricon-10濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機(jī)中在3000g下濃縮30min至體積為0.5ml；

4、取0.5ml磁珠，加入5ml反應(yīng)杯中，放入專用試管架，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取上清；