[發明專利]HLA-A*1101限制的WT1肽及含有其的藥物組合物

有效

• 申請號: 201110235503.3
• 申請日: 2007-12-14
• 公開（公告）號: CN102302788A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 杉山治夫
• 申請（專利權）人: 株式會社癌免疫研究所
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K31/7088;C12N5/0783;C12N5/0786;C12N5/078;A61P35/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權陸軍;劉健

本申請是國際申請日為2007年12月14日的國際申請PCT/JP2007/074146進入中國、申請號為200780048749.1的題為“HLA-A*1101限制的WT1肽及含有其的藥物組合物”的發明專利申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及HLA-A*1101限制的WT1肽，具體而言為含有由WT1蛋白質9個鄰接氨基酸組成的氨基酸序列的肽，其中該肽具有結合HLA-A*1101分子的能力，并且具有誘導CTL的能力。本發明也涉及具有結合HLA-A*1101分子的能力并且具有誘導CTL的能力的肽二聚體，其中兩個肽單體通過二硫鍵彼此結合，所述肽單體各自含有由WT1蛋白質9個鄰接氨基酸組成并且含有至少一個半胱氨酸殘基的氨基酸序列。此外，本發明涉及編碼該肽的多核苷酸、含有其的用于治療和/或預防癌癥的藥物組合物等。

背景技術

WT1基因(Wilms氏腫瘤1基因)被鑒定為負責兒童腎癌Wilms腫瘤的基因(非專利文件1和2)。WT1是具有鋅指結構的轉錄因子。最初，認為WT1基因是腫瘤抑制基因。然而，后來的研究(非專利文件3、4、5和6)顯示WT1基因相反在造血腫瘤和實體癌中起到癌基因的功能。

WT1基因在許多類型的惡性腫瘤中高水平表達。于是，已檢查無突變的WT1基因產物(其是自身蛋白質)是否在活體中具有免疫原性。結果揭示，在腫瘤細胞中高水平表達的衍生自WT1基因的蛋白質通過細胞內加工進行片段化，產生的肽與MHC?I類分子形成復合物，且該復合物被呈遞在細胞表面，而識別這種復合物的CTL可以通過肽接種誘導(非專利文件7、8和9)。在以WT1肽或WT1?cDNA免疫的小鼠中也顯示，表達WT1基因的移植的腫瘤細胞以高概率被排斥(非專利文件7和10)，然而生理上表達WT1基因的正常組織沒有被所誘導的CTL損傷(非專利文件7)。使用人細胞的體外實驗顯示，當使用Db126肽或WH187肽(SEQID?No：1的氨基酸187-195，SLGEQQYSV)刺激具有HLA-A^*0201的人外周血單核細胞時，WT1特異性CTL得到誘導，而誘導的CTL對內源性高水平表達WT1基因的腫瘤細胞具有特異的細胞毒活性，且這種CTL的細胞毒活性是HLA-A2限制的(非專利文件11)，其中所述Db126肽或WH187肽具有結合人MHC?I類分子之一HLA-A^*0201分子的高能力。使用與HLA-A^*2402(最常見于日本人HLA-A等位基因)匹配的WT1肽(WT1235；SEQ?ID?No：1的氨基酸235-243，CMTWNQMNL)的人細胞體外實驗顯示，WT1特異性CTL(TAK-1)得到誘導(非專利文件12)，而誘導的CTL不抑制正常造血干細胞的集落形成活性，所述正常造血干細胞部分生理上表達WT1基因(非專利文件12和13)。這些報告強烈提示，WT1特異性CTL不僅在小鼠而且在人類中是可誘導的，這種CTL對以高水平表達WT1基因的腫瘤細胞具有細胞毒活性，但是對生理上表達WT1基因的正常細胞不具有細胞毒活性(非專利文件7、10、11、12和13)。

WT1基因產物作為核蛋白存在，并在細胞質中由蛋白酶體加工以片段化為肽。片段化的肽由TAP(抗原肽轉運體)分子轉運到內質網腔中，與MHC?I類分子形成復合物，并且呈遞在細胞表面上。作為CTL前體細胞經TCR識別WT1肽-MHC?I類分子復合物的結果，WT1特異性CTL得到誘導，從而對通過MHC?I類分子呈遞WT1基因產物的腫瘤細胞施加細胞毒作用(非專利文件7、8和9)。于是，至少要求用于靶向WT1基因產物的癌癥免疫治療中的WT1肽是在活體中與MHC?I類分子結合的形式。然而，MHC?I類分子是多樣的，與各自MHC?I類分子結合的WT1肽的氨基酸序列彼此不同。因此，要求提供與MHC?I類各亞型匹配的肽。然而，迄今為止僅僅已知HLA-A^*2402分子、HLA-A^*0201分子、HLA-A^*2601分子和HLA-A^*3303分子限制的肽是HLA分子限制的WT1肽(分別見專利文件1、非專利文件11、專利文件2和專利文件3)。因此，需要發現HLA-A*1101限制的WT1肽。

專利文件1：WO?2003/106682

專利文件2：WO?2005/095598

專利文件3：日本專利申請號2006-45287

非專利文件1：Daniel?A.Haber等人，Cell.1990Jun?29；61(7)：1257-69.