[發(fā)明專利]新的Melan-A表位肽及其在預(yù)防和/或治療腫瘤中的用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110235044.9
• 申請日: 2011-08-11
• 公開（公告）號: CN102336821A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王歈;英函;焦順昌;孟昭婷
• 申請（專利權(quán)）人: 北京永泰免疫應(yīng)用科技有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C12N5/0783;A61K35/14;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 左路

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫治療領(lǐng)域，具體涉及腫瘤特異性抗原Melan-A的表位肽及其在預(yù)防和/或治療腫瘤中的用途。

背景技術(shù)

免疫系統(tǒng)是人體抵御腫瘤的重要屏障。各種因素導(dǎo)致的腫瘤，如由于化學(xué)致癌劑或病毒導(dǎo)致的腫瘤，會使得腫瘤細胞出現(xiàn)表達突變蛋白、異位表達蛋白、正常蛋白表達水平過高和表達病毒蛋白等現(xiàn)象。在正常的免疫系統(tǒng)中，機體的免疫細胞可能會識別并清除這些異常細胞，從而使機體免于罹患腫瘤。而長期處于免疫抑制狀態(tài)的人群，如器官移植、艾滋病患者等，腫瘤的發(fā)病率要遠遠高于正常人群。過繼性T細胞免疫治療則是腫瘤免疫治療中的重要手段之一，專指向腫瘤患者輸注具有抗腫瘤活性的免疫細胞，直接或通過激發(fā)機體免疫反應(yīng)殺傷腫瘤細胞，以達到治療目的的治療方法(Nat?Rev?Cancer，2008.8(4)：299-308)。輸注的細胞包括LAK、NK細胞、T淋巴細胞等。在一定的條件下，這些方法都獲得了一定程度上的成功。如NK細胞在造血干細胞移植后的抗白血病效應(yīng)，美國癌癥協(xié)會(NCI)Rosenberg?SA教授領(lǐng)導(dǎo)下進行的腫瘤浸潤淋巴細胞對黑色素瘤的治愈率可以達到50％以上(Science，2002.298(5594)：850-854)。

近年來，隨著一系列被CD4⁺T細胞識別的腫瘤抗原的鑒定，人們對于CD4⁺T細胞在抗腫瘤免疫反應(yīng)中的作用有了更進一步的認識。但CD4⁺T淋巴細胞運用于過繼性免疫治療中的例子并不多。CD4⁺T淋巴細胞雖然不同于細胞毒性T淋巴細胞(在胞漿內(nèi)含有穿孔素和顆粒酶等效應(yīng)分子)，但在識別靶細胞后，卻可以分泌大量的IFN-γ、IL-2等Th1類細胞因子。這些細胞因子不僅可以通過自分泌或旁分泌的方式為其它淋巴細胞提供生長因子，增強免疫提呈和淋巴細胞活化，而且可以直接促進腫瘤細胞的凋亡(Curr?Opin?Immunol，2004.16(3)：259-63)。CD4⁺T細胞在機體抗腫瘤免疫反應(yīng)中起著重要的作用，同時激活CD4⁺T細胞和CD8⁺T細胞是免疫治療的理想策略。

Melan-A為人類黑色素細胞分化抗原，表達于正常的黑色素細胞及幾乎所有黑色素瘤患者的腫瘤細胞，而在其它組織中不表達(Melanoma?Res，1998.8(4)：337-43)。Melan-A為黑色素瘤相關(guān)抗原中抗原性較強的一種，最易被體外黑色素瘤特異性多肽所激活的外周血淋巴細胞及腫瘤浸潤淋巴細胞所識別。在Melan-A上有數(shù)個免疫優(yōu)勢表位，它們能在體內(nèi)外誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性T淋巴細胞免疫應(yīng)答，因而在黑色素瘤特異性免疫治療方面有著廣闊的應(yīng)用前景。

發(fā)明概述

本研究以亞洲人群為研究對象，通過合成長度為30個氨基酸，重疊部分為20個氨基酸的肽段覆蓋Melan-A蛋白全長，在體外刺激人外周血單個核細胞(PBMC)，產(chǎn)生對Melan-A特異性反應(yīng)的CD4⁺T淋巴細胞，從而鑒定出新的MHC-II類限制性Melan-A表位肽。該表位肽可用于體外刺激產(chǎn)生對Melan-A具有特異性反應(yīng)性的CD4⁺T淋巴細胞。這些抗原特異性細胞，在接受抗原刺激后可以分泌大量可以直接或間接殺傷腫瘤細胞的細胞因子，因此能用于對表達Melan-A的腫瘤的過繼性免疫治療。該表位肽還可以用作預(yù)防和/或治療表達Melan-A的腫瘤的疫苗。

因此，在一個方面，本發(fā)明提供了新的MHC-II類限制性Melan-A表位肽。

在另一個方面，本發(fā)明提供了制備對Melan-A具有特異性反應(yīng)性的CD4⁺T淋巴細胞的方法。

本發(fā)明還提供了識別本發(fā)明的Melan-A表位肽并在識別后發(fā)生特異性反應(yīng)的CD4⁺T淋巴細胞以及這些細胞在制備用于預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物組合物中的用途。

最后，本發(fā)明還提供了包括本發(fā)明的Melan-A表位肽的用于預(yù)防和/或治療腫瘤的疫苗。

附圖說明

圖1：顯示來自健康供者106(HD106)的外周血單個核細胞經(jīng)Me1an-A混合肽刺激兩周后出現(xiàn)對Melan-A的特異性反應(yīng)。

圖2：顯示來自HD106的對Melan-A具有特異性反應(yīng)性的5號單克隆CD4⁺T細胞對Melan-A_21-50的特異性反應(yīng)。

圖3：來自HD106的5號單克隆CD4⁺T細胞對已知Melan-A表位肽的識別。