[發明專利]總前列腺特異性抗原(TPSA)定量測定試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201110234010.8
• 申請日: 2011-08-16
• 公開（公告）號: CN102360011A
• 公開（公告）日: 2012-02-22
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 內蒙古科慧生物科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 北京富天民宏濟知識產權代理事務所(普通合伙) 11272
• 代理人: 劉壽椿;龔雅民

技術領域

本發明涉及測定血清的試劑盒及其測試方法，尤其是涉及測定血清中總前列腺特異性抗 原(TPSA)含量的試劑盒及其測試方法。

背景技術

前列腺特異性抗原(PSA)是人體前列腺上皮組織細胞分泌的一種分子量為30～33kDa的 單鏈糖蛋白分子。在人體中主要存在于男性前列腺組織、精液和血清中。血清中的PSA以不 同的分子形式存在，臨床常用的血清PSA的形式主要有TPSA和FPSA。TPSA是血清中能夠檢測 出的所有PSA的分子形式，以PSA-α1-抗糜蛋白酶(占70％～85％)和FPSA為主，FPSA是一 種以游離的非絡合形式存在于血清中的PSA，在血清中無活性。總PSA(游離的PSA加復合PSA) 在良性前列腺增生和惡性的前列腺癌都會升高，游離PSA則較少受前列腺癌生長的影響。PSA 具有組織特異性，但并無腫瘤特異性，前列腺炎、良性前列腺增生和前列腺癌均可導致PSA 升高。目前臨床上用于測定PSA的方法主要有放免法、ELISA法、化學發光法等。

過去以放免為代表的總前列腺特異性抗原(TPSA)測定試劑盒受方法學的限制，其靈敏度 和抗干擾能力嚴重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市場，目前應用較多的為酶聯免疫 檢測技術和化學發光技術。化學發光技術興起于上個世紀80年代是繼酶聯免疫技術和放免技 術之后發展起來的新興技術，由于其高靈敏度、高特異性，同時方法簡便、快速，標記結合 物穩定，無放射性同位素損傷和污染等特點，在近些年得到了飛速發展。

磁微粒分離酶聯免疫檢測技術是一種以磁性微粒為固相分離載體，將免疫磁微粒分離技 術與酶聯免疫檢測技術相結合而建立的一種新型免疫檢測方法。傳統ELISA方法，抗原、抗 體的結合反應是在固相(ELISA板反應孔)表面進行的，而磁微粒分離酶聯免疫檢測方法，抗 原、抗體的結合反應也在近似液相的條件下進行，因而反應快速、徹底。與傳統ELISA相比 具有靈敏度高，檢測用時少的優點。

發明內容

本發明需要解決的技術問題在于提供一種總前列腺特異性抗原(TPSA)定量測定試劑盒 及其檢測方法，采用該試劑盒進行TPSA檢測具有較高的靈敏度和特異性，和更短的獲得檢測 結果的時間和更簡便的操作方式。

本發明提供了一種總前列腺特異性抗原(TPSA)的定量測定試劑盒，其包含的試劑有 TPSA磁分離試劑，酶反應物，反應增強劑，稀釋液，標準品、質控品，清洗液濃縮液以及底 物溶液。

所述的磁分離試劑含有標記有抗TPSA單克隆抗體的磁性微球。

所述的酶反應物是含有堿性磷酸酶標記的抗TPSA單克隆抗體。

所述的反應增強劑是含有Tris的緩沖液。

所述稀釋液是含有BSA溶液。

所述的標準品及質控品是含有一定量的TPSA抗原的BSA蛋白溶液。

所述清洗液濃縮液是含有TWEEN-20和Proclin-300的緩沖液。

所述的底物溶液為酶促化學發光底物溶液。

本發明總前列腺特異性抗原(TPSA)的定量測定試劑盒的制備方法，包括下述步驟：

第一步：磁分離試劑的制備過程

一、磁珠緩沖液配制操作步驟，配制1L：

1、稱取TRIS?4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，稱取0.96g?TWEEN-20于20ml容器中加適量 水使其完全溶解后，倒入上述容器中；

2、用移液器將Proclin-300量取0.2ml于10ml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容 器中，然后在上述1L容器中加入800ml純化水，充分攪拌；

3、調節PH計測量其PH值，調PH，控制PH在7.95-8.05之間；

4、稱取BSA?3g倒入上述1L容器中；

5、最后定容至1000ml，用0.2um濾器過濾；過濾完后貼好標簽于2-8℃冷庫貯存。

二、磁分離試劑的制備過程

1、將1.0mg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul?DMSO中，取2mg抗TPSA單克隆抗體溶于PH?9.5 的0.1mol/L?PB緩沖液中至總體積為1ml；

2、確定辛二酸二琥珀酰亞胺酯的投入量，用移液槍吸取辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1 的抗體溶液中，置室溫90min；