[發(fā)明專利]一種降解玉米赤霉烯酮的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110233738.9
• 申請日: 2011-08-16
• 公開（公告）號: CN102406098A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發(fā)明（設計）人: 馬向東;徐雪梅;李慧芳;李佩佩
• 申請（專利權）人: 青島蔚藍生物集團有限公司;濰坊康地恩生物科技有限公司
• 主分類號: A23L1/015
• 分類號: A23L1/015;A23L1/10
• 代理公司: 青島海昊知識產(chǎn)權事務所有限公司 37201
• 代理人: 張中南

技術領域

本發(fā)明屬于生物脫毒技術領域，具體涉及一種降解玉米赤霉烯酮的方法，即用黑曲霉的發(fā)酵產(chǎn)物來降解玉米赤霉烯酮。

背景技術

玉米赤霉烯酮(Zearalenone，簡稱ZEN)，是由鐮刀菌屬(Fusarium)的產(chǎn)毒菌，如禾谷鐮刀菌(F.graminearum)和三線鐮刀菌(F.tricinctum)等代謝生產(chǎn)的有毒物質(zhì)，廣泛存在于霉變的玉米、高粱、小麥、燕麥、大麥等谷類作物以及奶制品中。玉米赤霉烯酮具有雌激素作用，主要作用于生殖系統(tǒng)，可使家畜、家禽和實驗小鼠產(chǎn)生雌性激素亢進癥，妊娠期的動物(包括人)食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流產(chǎn)、死胎和畸胎等危害。而飼料和食品生產(chǎn)中所用的谷物(如玉米、小麥)是玉米赤霉烯酮產(chǎn)生的最好基質(zhì)。2009年奧特奇對我國的谷物原料的調(diào)查報告顯示，玉米赤霉烯酮的檢出率為88.7％，最大值達到7772.3ppb，遠遠超出了我國飼料的限量標準。因此，一方面要預防玉米赤霉烯酮產(chǎn)毒菌感染谷物，另一方面還要探索如何通過生物學方法來降解去除谷物中已有的玉米赤霉烯酮，使這些谷物還可用于其它的領域，產(chǎn)生一定經(jīng)濟價值。

目前，已有一些利用酵母菌、粉紅黏帚霉及根霉、毛霉的發(fā)酵產(chǎn)物來降解玉米赤霉烯酮的研究報道(Orsolya?Molnar，Systematic?and?Applied?Microbi?ology，2004，27(6)：661～671；Jan?U，Applied?and?Environmental?Microbiology，2007，73(2)：637～642)。同時，關于酶降解玉米赤霉烯酮的報道也不少，例如螺旋聚孢屬中的Clonostachysrosea可將玉米赤霉烯酮轉(zhuǎn)化為另一種毒性較低的化合物，而其中起作用的是一種水解酶(Naoko?Takahashi?Ando，Biochem?J.，2002，Jul?y?365(7)：1-6)。但目前尚未見關于黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)物降解玉米赤霉烯酮的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種黑曲霉的發(fā)酵產(chǎn)物在降解玉米赤霉烯酮(以下簡稱ZEN)中的應用。通過在體外模擬動物胃腸道環(huán)境下測定黑曲霉的發(fā)酵產(chǎn)物對ZEN標準品和發(fā)霉玉米中ZEN的降解效果，確定黑曲霉的發(fā)酵產(chǎn)物對ZEN的降解條件，為進一步開發(fā)ZEN生物解毒劑奠定了基礎。

申請人在本發(fā)明利用黑曲霉的發(fā)酵產(chǎn)物來降解玉米赤霉烯酮。

所述的黑曲霉可選用購自中國普通微生物菌種保藏管理中心，分類命名為黑曲霉(Aspergillus?niger)，保藏號：CGMCC?3.316。

所述的黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)物為發(fā)酵液干粉。

黑曲霉的發(fā)酵液干粉對發(fā)霉谷物中的玉米赤霉烯酮進行降解。

本發(fā)明的降解玉米赤霉烯酮的方法，優(yōu)選的黑曲霉發(fā)酵液干粉添加量的重量百分比為0.2％，在37℃、pH2.0條件下降解1.5h；或是發(fā)酵液干粉添加量的重量百分比為0.2％，在37℃、pH6.5條件下降解3.0h。

本發(fā)明應用黑曲霉的發(fā)酵產(chǎn)物對玉米赤霉烯酮進行降解，可以有效地降解發(fā)霉谷物中的玉米赤霉烯酮，從而恢復發(fā)霉谷物的應用價值。同時本發(fā)明通過在體外模擬胃腸道環(huán)境下測定黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)物對ZEN的降解效果，摸索出黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)物對ZEN的最佳降解條件，為進一步將其開發(fā)為生物解毒劑，用于谷物和飼料中ZEN的降解提供了堅實的基礎。

具體實施方式

本發(fā)明所應用的試劑可以應用任一款市售產(chǎn)品，例如玉米赤霉烯酮(ZEN)的標準品購于sigma公司，ZEN高靈敏度檢測試劑盒Zearalenone?Veratox購自英國NEOGEN公司。所用到的緩沖液的配制方法如下：

1、pH6.5的PBS：KCl：0.2g??KH₂PO4：0.204g??Na₂HPO₄·2H₂O：1.442gNaCl：8.066g溶解于1000ml蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH值為6.5；

2、pH2.0的PBS：KCl：0.2g??KH₂PO₄：0.204g??Na₂HPO₄·2H₂O：1.442gNaCl：8.066g溶解于1000ml蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH值為2.0；

3、胃蛋白酶溶液液：準確稱取胃蛋白酶(1∶10000)1.333g，溶于10ml?pH2.0的PBS溶液中，充分攪拌使其完全溶解；