[發(fā)明專利]卵黃抗體中病毒的滅活工藝

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110233651.1
• 申請日: 2011-08-16
• 公開（公告）號: CN102284070A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄧碧華;魏平華;盧宇;徐海;侯繼波
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學院;廣州格雷特生物科技有限公司
• 主分類號: A61L2/18
• 分類號: A61L2/18;C07K16/02;A61L101/44
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

一技術(shù)領(lǐng)域

???本發(fā)明涉及卵黃抗體中病毒的滅活工藝，是專門滅活卵黃中攜帶的病毒，屬于生物制藥中抗體治療劑領(lǐng)域。

二背景技術(shù)

?雞卵黃抗體（Egg?Yolk?Immunoglobulin）是存在于卵黃中的免疫球蛋白，它是由母雞血清中的免疫球蛋白轉(zhuǎn)移而來。卵黃抗體可以應(yīng)用于臨床疾病的治療，如雞傳染性法氏囊病、新城疫、鴨瘟、小鵝瘟、豬瘟等等。在臨床實踐中，卵黃抗體的預(yù)防和治療效果非常理想，同時卵黃抗體的制造工藝簡單價廉，幾年前在養(yǎng)禽業(yè)生產(chǎn)中用量很大，發(fā)揮過十分重要的作用。

但是，現(xiàn)有抗體類治療劑存在十分明顯的問題，因此被農(nóng)業(yè)部叫停。其原因是由于制備抗體采用的都不是SPF禽，所以其中極易攜帶垂直傳播性病原，如大腸桿菌、沙門氏菌、減蛋綜合征病毒、禽流感病毒等；并且由于企業(yè)生產(chǎn)條件簡單，在生產(chǎn)中也容易混雜入一些外源性病毒。鑒于此種情況，脫脂卵黃抗體必須進行禽源、外源性病原微生物的滅活處理，防止使用卵黃抗體后造成傳播病原的擴散甚至疾病的爆發(fā)。

β-丙內(nèi)酯(BPL)是一種雜環(huán)化合物，對病毒具有很強的滅活作用，比福爾馬林作用強25倍，而且對病毒抗原影響或破壞作用較小。其作用機制通過與嘌呤堿基(主要是鳥嘌呤)反應(yīng)改變病毒核酸結(jié)構(gòu)達到滅活病毒的目的，不蛋白發(fā)生反應(yīng)，不影響抗體的效價。BPL?雖是一種致癌物,?但極易水解,?37℃2小時可以完全水解，水解后形成人體脂肪代謝產(chǎn)物β-羥基丙酸,?對人體無害，在國外已廣泛用于各種疫苗的滅活。將BPL用于卵黃抗體外源型病毒滅活，具有安全的和不影響抗體效價等優(yōu)點。

現(xiàn)在技術(shù)中未見有β-丙內(nèi)酯滅活卵黃抗體中病毒的報道。

三發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問題

本發(fā)明的目的是提供一種滅活卵黃中所帶的病原微生物技術(shù)，以β-丙內(nèi)酯作為滅活劑，既能滅活病原微生物，又不破壞抗體活性。采用該技術(shù)滅活后的卵黃抗體安全、無毒并活性高。

技術(shù)方案

卵黃抗體中病毒的滅活工藝，其特征在于，利用β-丙內(nèi)酯加入到中，混合作用，滅活卵黃中的病毒，獲得安全無毒的卵黃抗體。其中脫脂卵黃抗體的制備方法為：攪拌卵黃，加等體積水稀釋勻漿，然后將勻漿的卵黃用質(zhì)量體積比為7%?的PEG-6000溶液稀釋，使?PEG-6000終濃度為質(zhì)量體積比3.5%，攪拌30min后，靜置于4℃，過夜，待水脂分層后，分離上清液，取上清液即為脫脂卵黃抗體。所述滅活方法具體為，將β-丙內(nèi)酯與脫脂卵黃抗體按體積比為0.075%~0.1%混合后，在4℃作用24小時，37℃2小時水解殘留β-丙內(nèi)酯，終止滅活，即獲得安全無毒的卵黃抗體。?

有益效果

本發(fā)明具有一下優(yōu)點：

1、安全：β-丙內(nèi)酯極易水解,?水解后形成人體脂肪代謝產(chǎn)物β-羥基丙酸,?對人體無害。

2、簡單、易于操作：基本不需要使用儀器，操作比較簡便。

3、不影響效價：β-丙內(nèi)酯不與抗體反應(yīng)，不影響抗體效價，對抗體的治療效果沒影響。

具體實施方式：

1、材料

1.1滅活劑?β-丙內(nèi)酯：（β-propionolactone，BPL?），深圳邁瑞爾化學技術(shù)有限公司進口分裝，CAS號57-57-8。

1.2?PEG-6000：聚乙二醇，北京海淀精細化工廠，批號：061017

1.3指示病毒：雞新城疫病毒NDV(La?Sota株)??批號：20010322，0.25ml。劑型：凍干毒。購自中監(jiān)所。

禽腺病毒EDS（AV127株）?批號：20010517，0.5ml。劑型：凍干毒。購自中監(jiān)所。

1.4?SPF雞胚：10日齡雞胚購自南京藥械廠。

2、方法

1）脫脂卵黃的制備：????

將雞蛋用清水洗去污物，再放入含0.5%新潔爾滅溶液浸泡20min，然后晾干。用75%酒精棉擦拭蛋殼，無菌操作打開蛋殼，將蛋清和蛋黃分開，把蛋黃放于滅菌燒杯中，加等體積水稀釋勻漿，然后將勻漿的卵黃用質(zhì)量體積比為7%?的PEG-6000溶液稀釋，使?PEG-6000終濃度為質(zhì)量體積比3.5%，攪拌30min后，靜置于4℃，過夜，待水脂分層后，分離上清液，上清液即為脫脂卵黃抗體。

2）β-丙內(nèi)酯滅活：