[發明專利]一種同時分析犬基因組DNA 17個基因座的熒光標記檢測試劑盒及其檢測方法和應用

有效

• 申請號: 201110232463.7
• 申請日: 2011-08-15
• 公開（公告）號: CN102321752A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 杜蔚安;葉俊華;鄭衛國;楊前勇;熊勇華;蘭康;陳麗娜;李濤;付平峰;王博
• 申請（專利權）人: 無錫中德美聯生物技術有限公司;公安部南昌警犬基地
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌

技術領域

本發明涉及一種熒光標記復合擴增檢測試劑盒，具體是涉及一種通過復合擴增同時分析犬基因組DNA16個STR基因座和DAmel基因座的五色熒光標記復合擴增檢測試劑盒。?

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背景技術

STR（short?tandem?repeat，短串聯重復序列）是存在于真核生物基因組中的一類具有長度多態性的DNA序列，其核心序列由2～6個堿基構成，因該核心序列在不同個體間呈不同數目的串聯重復而呈現出長度多態性，因而短串聯重復序列遺傳多態性在個體識別、親權鑒定、法醫鑒定、遺傳育種及遺傳連鎖圖譜構建等應用上起著非常重要的作用。?

STR基因座具有因片段小而容易擴增、各基因座的擴增條件相似而能夠構建檢測試劑盒的特點，因而具有靈敏、準確、快速、信息量大等優點，尤其是在建立DNA數據庫方面，STR復合擴增技術具有極大的優越性。長期的DNA檢驗實踐表明，STR基因座的遺傳多態性在品種間存在一定的差異，各個基因座間差別也很大。在犬類的個體識別、親權鑒定和遺傳育種等方面多采用美國ABI公司推薦的StockMarks?Animal?Genotyping?System的10個犬基因座。?

在實現本發明的過程中，發明人發現現有技術至少存在以下問題：美國ABI公司推薦的StockMarks?Animal?Genotyping?System?中僅有10個犬基因座，而且有部分基因座遺傳多態性不高，或是不同犬群間差異較大，由此給DNA檢驗技術的應用及其效率帶來一定的影響，不能滿足使用的要求。?

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發明內容

發明目的

本發明的目的是提供一種犬17個基因座的熒光標記復合擴增檢測試劑盒，提高了系統的累計個體識別力和累積非父排除率，滿足犬的個體識別、親權鑒定和遺傳育種等方面應用的需要。

技術方案

一種同時分析犬基因組DNA?17個基因座的熒光標記檢測試劑盒，其特征在于：該試劑盒含有引物混合物如下：

上述17基因座對應的引物對中至少有一個引物的5’端進行熒光染料標記。

作為一種優化方式所述的17個基因座對應的引物分四組并分別用四種不同的熒光染料進行標記；其中PEZ1、PEZ2、FH2010、PEZ5和PEZ12為一組，?DAmel、PEZ21、PEZ3、PEZ6和PEZ8為一組；FH2054、VWFX、FH2611和FH2132為一組；PEZ20、PEZ15和FH2079為一組；?

其中所述的四種熒光染料為FAM、HEX、TAMRA、ROX。

作為進一步優化方式：PEZ1、PEZ2、FH2010、PEZ5和PEZ12為一組，其對應的引物采用FAM標記；DAmel、PEZ21、PEZ3、PEZ6和PEZ8為一組，其對應的引物采用HEX標記；FH2054、VWFX、FH2611和FH2132為一組，其對應的引物采用TAMRA標記；PEZ20、PEZ15和FH2079為一組，其對應的引物采用ROX標記；?