[發明專利]一種基于多種微生物的急性毒性試驗方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201110231992.5
• 申請日: 2011-08-12
• 公開（公告）號: CN102277409A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 張國霞;吳泳標;孫國萍;許玫英;蔣雍君;郭詩韻
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所;佛山市環保技術與裝備研發專業中心
• 主分類號: C12Q1/32
• 分類號: C12Q1/32;C12Q1/02;C12R1/01;C12R1/13;C12R1/44;C12R1/38;C12R1/865;C12R1/645
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;余炳和

技術領域：

本發明涉及一種急性毒性的評價方法及其試劑盒，具體涉及一種基于多種微生物的急性毒性試驗方法及其試劑盒。

背景技術：

微生物試驗相對于其他生物試驗方法，在毒性檢測中具有不可比擬的優勢。微生物世代時間短，可以大大縮短試驗時間；操作容量小而受試生物量大，能夠反映整個群體的染毒效應，而非個別效應；微生物適應力強，能用于各種靈敏度要求不同的環境樣品的測定；沒有道德上的爭議存在。目前用于水質檢測的微生物檢測法主要有以下幾種：生物發光法、生長抑制法、呼吸計量法、酶活法及硝化速率法等等。

脫氫酶活性法是其中一種應用較多的生物試驗。應用脫氫酶檢測樣品毒性是通過測定毒物對細菌體內的脫氫酶活性的影響來確定毒物毒性。實驗中應用細菌活細胞作為酶源，在毒物作用下，微生物代謝作用的任何改變必將影響反應系統中脫氫酶活性。脫氫酶在各種生物的新陳代謝中都起著重要的作用。通過測定廢水、污染水體或化學品對脫氫酶活性的影響，了解污染物的毒性和生態學效應。在生物新陳代謝過程中，脫氫酶起著傳遞體作用，即將有機質的氫脫下，使有機質氧化，并將氫轉移給氧化型化合物。在無氧反應系統中，受毒物作用，脫氫酶活性降低，其程度與毒物毒性存在一定關系，所以可以用毒物對脫氫酶活性的影響確定毒物毒性的大小。測定脫氫酶活性要用到四氮唑鹽——一種在脫氫酶作用下還原為不同顏色的物質，用得較多的有TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)、MTT(溴化噻唑藍四氮唑)、INT(碘硝基氯化四氮唑藍)以及新一代水溶性的XTT(3，3′-[1-(苯氨酰基)-3，4-四氮唑]-二(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸鈉)、WST-1(2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-苯二磺酸)-2H-四唑單鈉鹽)等。結合現代物理學的光電檢測技術和計算機數據處理技術，還可制成便攜式野外水質毒性檢測儀，從而實現對水質毒性野外現場快速的檢測。

發明內容：

本發明的第一目的是提供一種基于多種微生物急性毒性試驗方法，利用該方法對待測樣品的急性毒性進行檢測，具有穩定性好，可靠的優點。

本發明的基于多種微生物的急性毒性試驗方法，其特征在于，包括以下步驟：

以Comamonas?testosterone?HJK?1.4-9，Brevibacterium?epidermidis?HJK?2.11-1，Staphylococcus?sciuri?HJK8.2-17，Diaphorobacter?nitroreducens?HJK?2.2-7，Brevundimonas?diminuta?HJK?2.2-9，Pseudomonas?Sp.HJK?1.6-3，Ochrobactrum?anthropi?HJK1.2-13，Citrobacter?freundii?HJK?2.3-11，Pantoea?agglomerans?HJK?2.3-6，Enterococcus?casseliflavus?HJK?2.3-10，Saccharomyces?cerevisiae?HJK?5.1-5作為受試微生物，利用脫氫酶活性法檢測待測樣品對上述11種微生物細胞的脫氫酶活性變化來評價待測樣品的毒性大小。

本發明還提供一種檢測待測樣品急性毒性的檢測試劑盒，包括受試微生物、培養受試微生物的培養液、培養受試微生物的器皿和四氮唑鹽，其特征在于，所述的受試微生物為Comamonas?testosterone?HJK?1.4-9，Brevibacterium?epidermidis?HJK?2.11-1，Staphylococcus?sciuri?HJK8.2-17，Diaphorobacter?nitroreducens?HJK?2.2-7，Brevundimonas?diminuta?HJK?2.2-9，Pseudomonas?Sp.HJK?1.6-3，Ochrobactrum?anthropi?HJK?1.2-13，Citrobacter?freundii?HJK?2.3-11，Pantoea?agglomerans?HJK?2.3-6，Enterococcus?casseliflavus?HJK?2.3-10和Saccharomyces?cerevisiae?HJK?5.1-5。

所述的培養受試微生物的器皿優選為96孔板，96孔板能使11種微生物和空白對照在同一個板上面反應，顯示，便于利用和觀察。

所述的四氮唑鹽優選為2，3，5-氯化三苯基四氮唑。