[發(fā)明專利]一種新組織血管生成方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110231591.X
• 申請(qǐng)日: 2011-08-12
• 公開（公告）號(hào): CN102321568A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張彥民;賀浪沖;代秉玲;王楠;鄭蕾;王嗣岑;張杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西安交通大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071
• 代理公司: 西安智大知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 61215
• 代理人: 弋才富

1.一種新組織血管生成方法，其特征在于：無(wú)菌條件下取小鼠或大鼠胸主動(dòng)脈、心、肝、脾、肺、腎和結(jié)腸組織，隨即放入預(yù)冷的PBS液中清洗，胸主動(dòng)脈的處理方法為用眼科手術(shù)剪及鑷子去除動(dòng)脈管外的纖維和脂肪組織，用PBS液清洗后，在放大鏡下，于預(yù)冷的DMEM培養(yǎng)基中切取成長(zhǎng)度為0.3mm的動(dòng)脈環(huán)或者剪成長(zhǎng)度為0.3mm的動(dòng)脈塊，而心、肝、脾、肺、腎和結(jié)腸組織的處理方法為用眼科手術(shù)剪及鑷子去除組織周邊的粘連組織后剪成1mm³大小的組織塊，取纖維蛋白原溶液平鋪于培養(yǎng)板中，培養(yǎng)板的每孔容量為200μL，培養(yǎng)板的每孔中加凝血酶1μL，搖勻后形成凝膠，將切取的組織塊植于培養(yǎng)板的凝膠上，再往培養(yǎng)板的每孔中加纖維蛋白原溶劑200μL和凝血酶1μL，搖勻后形成凝膠，這樣就形成了三明治式的夾層結(jié)構(gòu)，于該夾層結(jié)構(gòu)上加含質(zhì)量濃度3-10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基1mL，放入體積濃度為5％的CO₂和溫度為37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，以此就能生成主動(dòng)脈、心、肝、脾、肺、腎和結(jié)腸組織各自對(duì)應(yīng)的新組織血管。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新組織血管生成方法，其特征在于：所述的生成主動(dòng)脈、心、肝、脾、肺、腎和結(jié)腸組織各自對(duì)應(yīng)的新組織血管的速度快慢依次為：肺的新組織血管≥脾的新組織血管＞肝的新組織血管≥心的新組織血管＞腎的新組織血管≥結(jié)腸的新組織血管＞血管的新組織血管，其中結(jié)腸的新組織血管生成的過(guò)程分為內(nèi)皮細(xì)胞遷出形成血管和血管生成兩種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的新組織血管生成方法，其特征在于：所述的DMEM培養(yǎng)基中可包括VEGF或者bFGF生長(zhǎng)因子。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的新組織血管生成方法，其特征在于：所述的肺的新組織血管生成后加入塔斯品堿，能對(duì)于肺的新組織血管具有抑制作用，而所述的結(jié)腸的新組織血管生成后加入塔斯品堿衍生物1822對(duì)結(jié)腸組織血管生成具有抑制作用。