[發(fā)明專利]一種乳酸鏈球菌素的提取方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110230940.6
• 申請(qǐng)日: 2011-08-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102304172A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉欣;魯吉珂
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鄭州奇泓生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/315
• 分類號(hào): C07K14/315;C07K1/14
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 姜振東

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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種天然食品防腐劑的制備方法，具體是一種從乳酸鏈球菌或乳酸乳球菌發(fā)酵濃縮液中分離提取乳酸鏈球菌素的方法。

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背景技術(shù)

乳酸鏈球菌素又稱乳球菌肽或乳鏈菌肽，英文名Nisin，是由乳酸鏈球菌（Streptococcus?lactis）或乳酸乳球菌（Lactococcus?lactis）在代謝過(guò)程中產(chǎn)生的具有很強(qiáng)殺菌作用的多肽，一級(jí)結(jié)構(gòu)由34個(gè)氨基酸組成，分子量約為3510Da。乳酸鏈球菌素是一種天然食品防腐劑，能抑制葡萄球菌屬、鏈球菌屬和芽孢桿菌屬等大部分G⁺菌及其芽孢的生長(zhǎng)和繁殖，具有抗菌性強(qiáng)、對(duì)人體無(wú)毒、水溶性好、熱穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于乳制品、罐頭食品、肉制品和飲料的防腐保鮮。

自二十世紀(jì)六十年代以來(lái)，從發(fā)酵液中提取乳酸鏈球菌素的方法和手段陸續(xù)建立，其回收過(guò)程主要包括如下步驟：發(fā)酵液酸化、加熱、濃縮、鹽析（或噴霧干燥）、真空干燥。濃縮方法主要有：低溫真空濃縮法、超濾濃縮法、泡沫濃縮、吸附濃縮。吸附法在發(fā)酵液中加入固體顆粒吸附劑吸附乳酸鏈球菌素，解吸后將解吸液鹽析或噴霧干燥，制成粉末狀乳酸鏈球菌素產(chǎn)品；膜過(guò)濾法首先采用板框過(guò)濾對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行預(yù)處理，去除菌體等固形物，濾液用超濾膜濃縮后，濃縮液鹽析或噴霧干燥，制成乳酸鏈球菌素粉末。

發(fā)明專利“從發(fā)酵液中分離提取乳鏈菌肽的方法”（申請(qǐng)?zhí)枺?0129928，公開(kāi)號(hào)：1293201）采用硅藻土、大孔樹脂等吸附劑吸附乳酸鏈球菌素，用聚乙二醇的酸性水溶液解吸附后噴霧干燥，吸附劑的成本雖然低廉，但還不是最理想，且解吸附劑聚乙二醇難以去除，會(huì)進(jìn)入乳酸鏈球菌素成品，影響產(chǎn)品純度。

發(fā)明專利“從乳酸乳球菌發(fā)酵液中分離乳酸鏈球菌素的方法”（申請(qǐng)?zhí)枺?00510066481.7，公開(kāi)號(hào)：1687110）采用膜過(guò)濾方法，用無(wú)機(jī)膜或管式膜從發(fā)酵液中去除菌體和固體等分子量比乳酸鏈球菌素分子量大的物質(zhì)；用卷式膜超濾從發(fā)酵液中去除分子量比乳酸鏈球菌素分子量小的物質(zhì),得到的發(fā)酵液濃縮物，加入固體食鹽，噴霧干燥后食鹽含量為10-50%。

發(fā)明專利“一種天然防腐劑的工業(yè)化純化工藝”（授權(quán)公告號(hào)CN?100554276C）采用離子交換層析方法獲得高純度乳酸鏈球菌素，該方法由于投資成本、操作成本較高還不具備工業(yè)實(shí)用價(jià)值。

發(fā)明專利“一種乳酸鏈球菌素的制備方法?”（授權(quán)公告號(hào)：101113463B）采用超濾濃縮、泡沫濃縮兩種濃縮技術(shù)完成發(fā)酵液的濃縮，最后采用噴霧干燥技術(shù)得到乳酸鏈球菌素產(chǎn)品，依然沒(méi)有解決產(chǎn)品純度低的問(wèn)題。

目前，乳酸鏈球菌素提純工藝主要采用鹽析和噴霧干燥的方式，產(chǎn)品中鹽含量高，乳酸鏈球菌素純度為20%，并且提取步驟繁瑣，純化過(guò)程復(fù)雜，存在提取成本高等缺陷。

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發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的正是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中所存在的鹽含量高、提取工藝復(fù)雜和產(chǎn)品純度第的缺陷而專門研制的一種新的乳酸鏈球菌素的提取方法。

本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明的乳酸鏈球菌素的提取方法包括以下步驟：

（1）將乳酸鏈球菌素發(fā)酵濃縮液，用鹽酸調(diào)pH為1.7-3.0，與水微溶性有機(jī)溶劑或水不溶性有機(jī)溶劑混合，所用有機(jī)溶劑與乳酸鏈球菌素發(fā)酵濃縮液的體積比為1∶5-1∶1，所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷、正丁醇、乙酸乙酯、四氯化碳中的任意一種，或任意兩種組合；當(dāng)有機(jī)溶劑為兩種組合時(shí)，兩種溶劑體積比為：1∶1-1∶10。

（2）攪拌靜置，固相分離，得乳酸鏈球菌素濕餅，在40℃-60℃的烘箱中真空減壓干燥，即得乳酸鏈球菌素產(chǎn)品。

在本發(fā)明中，乳酸鏈球菌素發(fā)酵濃縮液是將發(fā)酵完成的乳酸菌鏈球菌素發(fā)酵液采用低溫真空濃縮、超濾濃縮、泡沫濃縮、吸附濃縮的方法去除菌體而得到的濃縮液。

整個(gè)提取過(guò)程中的操作溫度是4-50℃。

本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)是采用有機(jī)溶劑沉淀乳酸鏈球菌素，克服了現(xiàn)有工藝鹽含量高、產(chǎn)品純度低的缺陷，乳酸鏈球菌素產(chǎn)品純度高于50%。方法安全簡(jiǎn)便、實(shí)用、成本低。

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具體實(shí)施方式

實(shí)施例一：

本實(shí)施例中，乳酸鏈球菌素按以下步驟提取：

（一）調(diào)pH：取乳酸鏈球菌素濃縮發(fā)酵液（菌體吸附后解吸，濾除菌體后制得，效價(jià)為51.8萬(wàn)/ml）1L，用鹽酸調(diào)pH至2.0。