[發(fā)明專利]治療或預防癌癥的藥物

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110229728.8
• 申請日: 2008-09-07
• 公開（公告）號: CN102274505A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葛輝
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州愛生基因有限公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 孫仿衛(wèi);汪青

本發(fā)明是申請日為2008年9月7日、申請?zhí)枮?00810160891.1、名稱為“治療或預防癌癥的方法和藥物”的中國發(fā)明專利申請的分案申請。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及治療或預防癌癥的方法和藥物以及抗癌藥物篩選方法。

背景技術(shù)

人轉(zhuǎn)錄正輔因子4(PC4，也稱p14、p15、Sub1的同源類似物等)是一種單鏈DNA結(jié)合蛋白，這種蛋白由127個氨基酸殘基組成且靠近N-端有數(shù)個絲氨酸富集區(qū)。PC4已被克隆并鑒定為一種能通過與許多序列特異性和細胞特異性調(diào)節(jié)子直接作用來介導許多基因的轉(zhuǎn)錄活化的通用正輔因子(參見文獻Ge等，Cell(1994)78：513-523；Kretzschmar，M.等，Cell(1994)78：525-534)。PC4直接作用的這些調(diào)節(jié)子包括許多核激素受體、腫瘤抑制子、癌蛋白、以及腫瘤的發(fā)生過程和其他人類疾病的病變過程中所必須的重要因子。

腫瘤抑制蛋白P53直接與PC4蛋白在轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生相互作用，從而控制了PC4的表達。另外，PC4作為P53的唯一激活子可以調(diào)節(jié)許多參與細胞周期、凋亡、DNA修復和其他細胞應答的基因的轉(zhuǎn)錄(參見文獻Kishore?A.H.等，Biochem.J.(2007)BJ20070390；Banerjee，S.等，Mol.Cell?Biol.(2004)24：2052-2062)。PC4的活性受到翻譯后修飾的進一步調(diào)節(jié)，該翻譯后修飾的類型至少包括磷酸化修飾和乙酰化修飾。PC4被磷酸化修飾之后，其與目標激活因子作用的活性被抑制且能反向介導其輔激活因子的功能。質(zhì)譜分析結(jié)果表明：體內(nèi)的PC4超磷酸化修飾主要由酪蛋白激酶II介導且僅發(fā)生在N-端絲氨酸富集區(qū)(參見文獻Ge等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1994)91：12691-12695)。PC4的乙酰化修飾由P300介導且受到磷酸化修飾的抑制(Kumor，P.B.R.等，J.Biol.Chem.(2001)276：16804-16809)。

到目前為止，大家還不清楚PC4在調(diào)節(jié)基因中所起的作用是否與癌癥或腫瘤的發(fā)生有關(guān)。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明人采用了包括爪蟾卵母細胞系、人體組織、其他哺乳動物細胞系在內(nèi)的不同的模式生物體系，驚奇地發(fā)現(xiàn)PC4具有癌蛋白的功能且在細胞分化、腫瘤發(fā)育和病變的過程中起重要作用，見圖10示出的PC4的多種功能，所有這些功能，尤其是圖10中標注下劃線的功能，都與癌癥發(fā)病機理相關(guān)或者是癌癥發(fā)病的基礎(chǔ)。特別是，發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)在很多惡性腫瘤組織中，如在肺癌組織、膀胱癌組織、結(jié)腸癌組織、乳腺癌組織、子宮內(nèi)膜癌組織、甲狀腺癌組織、小腸癌組織中，都發(fā)現(xiàn)PC4在蛋白水平被活化。相反，在相應的沒有經(jīng)歷過快速生長的正常組織中的PC4的蛋白水平?jīng)]有升高。在癌細胞系和其他轉(zhuǎn)化細胞系中還發(fā)現(xiàn)了PC4RNA水平的升高，但是在原代細胞系中并沒有發(fā)現(xiàn)。

例如，發(fā)明人測定了非洲爪蟾的變態(tài)發(fā)育過程中的PC4的表達水平。測定方法如下：收集不同發(fā)育階段的非洲爪蟾的整體溶解產(chǎn)物，監(jiān)測每個溶解產(chǎn)物的蛋白含量，選取50ug每個階段溶解產(chǎn)物中的總蛋白，上SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進行分析，然后將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)到硝酸纖維膜上，最后進行蛋白印跡分析，即采用抗PC4的多克隆抗體來檢測被轉(zhuǎn)到硝酸纖維膜上的蛋白。測定結(jié)果如圖5A、圖5B和圖5C所示，PC4的表達水平與非洲爪蟾蜍變態(tài)發(fā)育過程相關(guān)，當前變態(tài)發(fā)育開始時，PC4在56～58這個階段被顯著活化。

發(fā)明人通過轉(zhuǎn)染檢測實驗證明PC4與細胞死亡相關(guān)。將人PC4編碼區(qū)(野生型的或絲氨酸富集區(qū)突變型的人PC4編碼區(qū))與綠色熒光蛋白(GFP)的編碼區(qū)融合后，再亞克隆到包含有CMV啟動子哺乳動物表達載體(pcDNA3.1)中，再將得到合成載體瞬時轉(zhuǎn)染到HeLa細胞(參見Ge等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1994)91：12691-12695)。轉(zhuǎn)染后24小時，在激光共聚焦顯微鏡下觀測樣本，能觀察到PC4在轉(zhuǎn)染的HeLa細胞中所起的作用。結(jié)果如圖6A、圖6B、圖6C所示，圖6A是對照組(未轉(zhuǎn)染的HeLa細胞)的熒光檢測結(jié)果，圖6B是轉(zhuǎn)染了野生型PC4的HeLa細胞的熒光檢測結(jié)果，圖6C是轉(zhuǎn)染了N-端絲氨酸區(qū)突變型PC4(PC4-ΔS，其不能被磷酸化，所以應該是完全活化的)的HeLa細胞的熒光檢測結(jié)果。三幅圖對比可以看出，PC4位于細胞核中且能夠?qū)е氯旧w凝集和細胞凋亡，尤其是從圖6C可以判斷PC4的過量表達引發(fā)了凋亡，這一點與癌蛋白的作用是一致的。