[發明專利]大腸桿菌O157和單核細胞增生李斯特氏菌共檢測試條

無效

• 申請號: 201110229465.0
• 申請日: 2011-08-11
• 公開（公告）號: CN102411053A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 周育;張巧艷;徐俊鋒;王強
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/544;G01N33/531
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

(一)技術領域

本發明涉及一種免疫膠體金快速檢測微生物試條，特別涉及大腸桿菌O157和單核細胞增生李斯特氏菌同步檢測試條及快速檢測大腸桿菌O157和單核細胞增生李斯特氏菌的技術。?

(二)背景技術

在食源性疾病中細菌性食物中毒發生率占首位，據統計我國每年發生的細菌性食物中毒事件占食物中毒事件總數的30％～90％，人數占食物中毒總人數的60％～90％，細菌性食物中毒嚴重危害著人們的身體健康。?

大腸桿菌O157(Escherichia?coli?O157)和單核細胞增生李斯特氏菌(Listeria?monocytogenes)是兩類引起人類食物中毒重要的致病菌。大腸桿菌O157是腸出血性大腸桿菌(enterohemorrhagic?Escherichia?coli，EHEC)的一種主要血清型，可引起出血性結腸炎，感染病人的典型癥狀為血便、腹痛、低熱或不發熱，約有10％的病人發展為溶血性尿毒綜合癥，并可對被感染病人的腸道、肝、脾、腎、淋巴、腦、呼吸系統和神經系統造成損傷，平均死亡率為2％～7％。老人和兒童為高危人群，一旦感染，死亡率高達30％以上。世界衛生組織把大腸桿菌O157出血性腸炎列為新發傳染病。單核細胞增生李斯特氏菌是一種能引起人畜共患病的致病菌，在4℃的環境中仍可生長繁殖，可通過眼睛及破損的皮膚、粘膜進入體內而造成感染，可使人和動物患腦膜炎、敗血癥、及造成懷孕婦女流產、死胎等疾病，死亡率高達30％～70％。國內外對單核細胞增生李斯特氏菌給以高度重視，WHO將其列為90年代食品中四大高危性致病菌之一。大腸桿菌O157和單核細胞增生李斯特氏菌主要是通過污染水產品、乳制品(生奶和軟奶酪)、畜禽產品、生熟肉制品、蔬菜等，引起食源性疾病的爆發。?

從各類食品中快速、準確地檢測大腸桿菌O157和/或單核細胞增生李斯特氏菌，可預防和控制這兩類致病菌感染疫情的發生及蔓延。目前，對大腸桿菌O157和單核增生李斯特氏菌的檢測主要利用微生物培養和生化鑒定的方法以及分子生物學方法。細菌培養診斷技術需要較長時間，一般需要24小時以上，甚至幾天，不利于及時確診。另外，無論是培養診斷技術還是PCR檢測技術，都需要一定的儀器設備和專業的檢測技術人員才能順利進行。近年來，由于膠體金免疫層析技術敏感性高、特異性強、檢測方便快捷，且具有操作安全(無放免檢測技術產生放射性污染)、適于單人份檢測(放免技術和酶標試劑盒不適于單人份或少量樣品的檢測)等優點，已被逐漸應用于設計各類病原微生物診斷試劑盒。雖然國內外市場上已有大腸桿菌O157快速檢測相關產品，但是大腸桿菌O157和單核細胞增生李斯特氏菌在食品及醫藥衛生行業中，有著相似的污染途徑和污染特點，常常在食品加工過程和醫療衛樣品中同時污染，通過大腸桿菌O157和單核細胞增生李斯特氏菌同步檢測技術的應用，可有效的提高兩類食源性致病菌的檢測效率，并降低檢測成本。?

(三)發明內容

本發明目的是提供一種簡便、快捷的能夠同步檢測食品或醫療衛生樣品中大腸桿菌O157和單核細胞增生李斯特氏菌測試條及快速檢測大腸桿菌O157和單核細胞增生李斯特氏菌的檢測技術，該試條簡便、快捷，能同步檢測食品或醫療衛生樣品中大腸桿菌O157和單核細胞增生李斯特氏菌。?

本發明的目的之二是提供一對針對大腸桿菌O157的不同抗原位點的特異性抗體和一對針對單核細胞增生李斯特氏菌的不同抗原位點的特異性抗體，兩種菌每對抗體中的一個抗體被標記膠體金。?

本發明的目的之三是提供一種適合于同時標記大腸桿菌O157和單核?細胞增生李斯特氏菌特異性抗體的膠體金制備方法。?

為實現本發明目的，本發明采用的技術方案是：?

一種大腸桿菌O157和單核細胞增生李斯特氏菌共檢測試條，所述測試條為鑲嵌在支撐板內的免疫膠體金測試條，所述的免疫膠體金測試條由膠體金墊和硝酸纖維素膜、吸水材料連接而成，所述膠體金墊和硝酸纖維素膜連接，所述的膠體金墊一端連接有下端吸水材料，所述的硝酸纖維素膜一端連接有上端吸水材料，所述的膠體金墊是將大腸桿菌O157抗體和單核細胞增生李斯特氏菌抗體分別用膠體金標記，以玻璃纖維膜作為載體，以BIODOT平臺上的BIRJET氣壓噴頭噴到玻璃纖維膜上制成的膠體金墊，所述的硝酸纖維素膜上分段包被有大腸桿菌O157抗體、單核細胞增生李斯特氏菌抗體和抗鼠IgG抗體，并分別形成大腸桿菌O157檢測條帶(A區)、單核細胞增生李斯特氏菌檢測條帶(B區)及抗鼠IgG抗體對照條帶(C區)。?