[發明專利]一種低成本流水化生產組培苗的方法

有效

• 申請號: 201110229381.7
• 申請日: 2011-08-11
• 公開（公告）號: CN102349445A
• 公開（公告）日: 2012-02-15
• 發明（設計）人: 何俊蓉;王躍華;蔣彧;卓碧萍;文利;劉菲;李世元;楊桂蓉
• 申請（專利權）人: 四川省農業科學院園藝研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產權代理有限公司 51214
• 代理人: 吳彥峰;劉世權

1.一種低成本流水化生產組培苗的方法，包括以下步驟：

（一）培養基的配制：

??（1）?稱取以下重量分數的藥品分別置于燒杯中：

KH₂PO₄??3.75

NH₄NO_3???36.43

KNO_3???41.94

CaCl₂·2H₂O??9.71

MgSO₄·7H₂O??8.17

在各燒杯中分別加入藥品總重量33-34倍重的純凈水溶解后，按照所列各藥品先后順序將溶液緩慢混合入更大的燒杯中，同時不斷攪拌，待用；

（2）稱取以下重量分數的藥品，藥品總質量為（1）中藥品總質量的1/22：

MnSO₄·4H₂O???10.8????????????ZnSO₄·7H₂O????4.17

H₃BO_{3????????????????}?3.00????????????KI????????????0.40

Na₂MoO₄·2H₂O??0.12???????????CoCl₂·6H₂O?????0.012

CuSO₄·5H₂O???0.012???????????FeSO₄·7H₂O????13.47

Na₂—EDTA?????18.07??????????煙酸???????????0.24

維生素B6?????0.24???????????維生素B1???????0.05

甘氨酸????????0.97???????????其余為肌醇

將以上藥品置于燒杯中，加藥品總重量1000倍重的純凈水溶解，

緩慢倒入（1）中配制好的溶液中，攪拌混勻后，待用；

（3）?配制濃度為0.2mg/ml的6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）和萘乙酸（NAA）溶液；

（4）稱取（2）中藥品總重量30倍的瓊脂、150倍的蔗糖倒入（1）步驟中的溶液中攪拌，加熱沸騰后，根據不同植物的試管苗加入不同體積的（3）配制的6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）和萘乙酸（NAA）溶液，最后按（1）中藥品總重量計，每4.53g定容到1000mL，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液（1N）調節培養基的PH值到5.8；

（二）?分裝與滅菌：??

將配制好的培養基趁熱分裝入聚丙烯薄膜袋中，用小夾子固定在一個用鐵絲做成的簡易框架上使其直立，然后放入高壓滅菌鍋消毒，滅菌時間在121℃保持18～20min即可；

??（三）無菌操作：

（1）無菌操作實驗器具和材料的準備：包括超凈工作臺的無菌處理，消毒雙手及切割刀和鑷子等操作工具；

（2）滅菌結束后，將簡易架子放在超凈工作臺上，整理薄膜袋使其能夠直立，用塑料袋封口機封住袋口，薄膜袋靜置至培養基凝固，待用；

（3）流水作業進行外植體的分離與接種：裝有試管苗的培養袋、操作器具、培養皿及塑料袋封口機等用新潔爾滅或75%酒精擦拭消毒后放入超凈工作臺內；1號組培技術工人在超凈工作臺內將試管苗從培養袋中取出，置無菌濾紙上，用切割刀按照不同試管苗的繁殖要求對待繁殖的試管苗進行切割；同時2號技術工人剪開已灌裝培養基且培養基已凝固的薄膜袋封口處，用消毒過并冷卻的鑷子將1號組培技術工人切割的繁殖的試管苗夾入薄膜袋內；3號組培技術工人將2號組培技術工人放入的塊莖或莖段微插入培養基中，若是葉柄水平放置；4號組培技術工人將3號組培技術工人做好的薄膜袋，用塑料袋封口機將其薄膜袋封口并編號，放置于培養室中的培養架上；

（四）按(三)所述步驟進行無菌操作，將薄膜袋封裝的試管苗放置于培養室中的培養架上進行組織培養，組織培養的照明光源采用節能燈。

2.根據權利要求1所述的一種低成本流水化生產組培苗的方法，其特征在于：組織培養的照明光源采用11瓦的節能燈。