[發明專利]用于干細胞富集的切向流過濾裝置和方法

有效

• 申請號: 201110228728.6
• 申請日: 2004-11-19
• 公開（公告）號: CN102321573A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: M·L·博什;P·A·洛德格;J·A·麥克阿徹恩;A·L·博因頓;P·G·胡根霍爾茨
• 申請（專利權）人: 西北生物治療藥物公司
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074;C12N5/0775;C12N5/0789;C12M1/12;A61K35/12;A61K35/14;A61K35/28;A61P9/00;A61P9/04;A61P9/10;A61P43/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 劉曉東

1.一種從來自受試者的樣品分離干細胞的方法，其中該樣品包含干細胞和非干細胞成分，該方法包括通過下列步驟在切向流過濾裝置上分離：

(i)將樣品通過去除裝置(1)中的入口(6)引入包括交叉流室(3)的去除裝置；

(ii)使樣品經受與具有約1至約10微米孔徑大小的過濾器(5)基本上平行的交叉流；

(iii)液體通過過濾器經受過濾；和

(iv)從樣品中選擇性除去非干細胞成分，形成富含干細胞的細胞群體。

2.根據權利要求1的方法，進一步包括：用白細胞提取法、密度離心、差異裂解法、過濾或暗黃覆蓋層的制備從受試者制備樣品，用于引入去除裝置。

3.根據權利要求1的方法，其中樣品是骨髓、組織懸液、器官懸液或血液成分。

4.根據權利要求1的方法，其中非干細胞成分是基質、紅細胞、血漿和血小板。

5.根據權利要求1的方法，進一步包括重復步驟(i)、(ii)和(iii)至少兩次以形成富含干細胞的細胞群體。

6.根據權利要求1的方法，其中干細胞是造血干細胞、間充質干細胞或多能干細胞。

7.根據權利要求5的方法，其中造血干細胞是CD34⁺細胞。

8.根據權利要求3的方法，其中干細胞是造血干細胞、間充質干細胞或多能干細胞。

9.根據權利要求8的方法，其中造血干細胞是CD34⁺細胞。

10.根據權利要求1的方法，其中通過給予干細胞動員劑，該受試者已經歷干細胞動員。

11.根據權利要求10的方法，其中干細胞動員劑是M-CSF、G-CSF、GM-CSF或環磷酰胺。

12.根據權利要求1的方法，其中切向流過濾裝置具有提供樣品進入交叉流室入口的預定進料速度的單元；控制通過過濾器和進入濾液室的過濾速度的單元；并且其中過濾速度控制單元將過濾速度限制于小于過濾器無壓迫的過濾速度。

13.根據權利要求1的方法，其中樣品被預處理以誘導與干細胞基本上相同大小的細胞群體的細胞皺縮。

14.根據權利要求13的方法，其中基本上相同大小的細胞群體是粒細胞。

15.根據權利要求13的方法，其中預處理包括使細胞接觸包含二甲基亞砜(DMSO)的生理學可接受溶液。

16.根據權利要求15的方法，其中DMSO終濃度在5％和20％之間。

17.根據權利要求16的方法，其中DMSO終濃度在10％和15％之間。

18.根據權利要求17的方法，其中DMSO終濃度是12.5％。

19.根據權利要求17的方法，其中DMSO終濃度是15％。

20.根據權利要求15的方法，其中生理學可接受溶液是低離子強度的。

21.根據權利要求13的方法，其中預處理包括使細胞接觸包含甘油的生理學可接受溶液。

22.根據權利要求21的方法，其中甘油終濃度在0.5mol/L和2.5mol/L之間。

23.根據權利要求21的方法，其中甘油終濃度是1mol/L。

24.根據權利要求14的方法，其中通過裂解從細胞混合物中優先除去粒細胞。

25.根據權利要求24的方法，其中裂解是通過使樣品順序接觸有效量的DMSO和甘油來進行的。

26.根據權利要求25的方法，其中樣品接觸的是具有低滲透強度的溶液。