[發明專利]從動物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工藝

無效

• 申請號: 201110228061.X
• 申請日: 2011-08-10
• 公開（公告）號: CN102250851A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 葉躍國;臧盛;王雅靜;盧進峰;方俊生;袁訓安;尹倫
• 申請（專利權）人: 天津寶迪農業科技股份有限公司
• 主分類號: C12N9/08
• 分類號: C12N9/08
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 董一寧

1.一種從動物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工藝，其特征在于：依照下列步驟完成：

(1)在新鮮的動物血液中加入檸檬酸鈉做抗凝處理，離心收集紅細胞，然后加入紅細胞體積1-3倍的去離子水，不斷攪拌，使紅細胞破碎，得溶血液；

(2)向溶血液中加入單價中性金屬鹽，調節PH值到4.0-7.0，加熱至55-75℃，保溫反應30-100min，冷卻至室溫，離心取上清，得SOD粗提液；

(3)用中空纖維超濾裝置對SOD粗提液進行超濾濃縮得SOD濃縮液；

(4)向SOD濃縮液中邊攪拌邊緩慢加入0.4-1倍體積的預冷丙酮，離心取上清液；

(5)然后向步驟(4)所得的清液中邊攪拌邊緩慢加入1.2-1.5倍體積的預冷丙酮，離心取沉淀；

(6)將沉淀用去離子水溶解，經過陰離子交換樹脂或分子篩層析，冷凍干燥即可得SOD精品凍干粉。

2.根據權利要求1所述的從動物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工藝，其特征在于：上述抗凝處理時所使用的抗凝劑為食品級檸檬酸鈉，添加量為3.5-5g/Kg動物血，攪拌溶血時間30-120min。

3.根據權利要求1所述的從動物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工藝，其特征在于：上述單價中性金屬鹽可以是堿金屬的氯化物、溴化物、硝酸鹽和硫酸鹽中的任一種或幾種的混合物，至其終濃度為0.1-1.5mol/L。

4.根據權利要求1所述的從動物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工藝，其特征在于：上述步驟(3)使用的中空纖維超濾裝置選擇截留分子量為4K-15K的膜組件，保持回流壓0.04-0.1MPa。

5.根據權利要求1所述的從動物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工藝，其特征在于：上述步驟(6)中使用的陰離子交換層析是DEAE陰離子交換層析，層析柱先用pH6.5～8.0的2.5mM的磷酸緩沖液平衡，至280nm無光吸收，然后上樣，換用單一濃度的洗脫液洗脫至280nm無光吸收，收集SOD活力峰。其中的單一濃度洗脫液為與平衡層析柱的緩沖液pH相同、濃度為4～8mM的磷酸緩沖液。

6.根據權利要求1所述的從動物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工藝，其特征在于：上述步驟(6)中使用的分子篩柱層析是Sephadex?G100或Sephadex?G25柱層析，層析柱先用蒸餾水平衡，然后上樣，再以蒸餾水洗脫，收集SOD活力峰。