[發明專利]檢測安定的磁顆粒化學發光試劑盒及其應用

無效

• 申請號: 201110227611.6
• 申請日: 2011-08-10
• 公開（公告）號: CN102928418A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 萬宇平;陳蘭珍;馮靜;楊秀賢;聶雯瑩;陳煒玲
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種化學發光檢測試劑盒及其測試方法。特別是檢測動物源性食品中安定的磁顆粒化學發光檢測試劑盒。

背景技術

安定(Diazepam)作為一種鎮靜劑在畜禽中的應用日益廣泛，可以減少畜禽動物的運動量，增加動物的體重并可保證畜禽在長途運輸中不會產生應激反應。但動物大量攝取安定會導致藥物殘留于食品而被人體吸收，大劑量可產生中樞神經抑制，呼吸抑制等中毒表現。長期服用該類藥物可產生依賴性或成癮性，突然停藥可產生停藥反應，表現為抑郁、精神激動、失眠等。

目前，用于安定殘留檢測的方法主要是高效液相色譜分析法(HPLC)和酶聯免疫法(ELISA)。高效液相色譜法操作繁瑣，檢測費用昂貴，對檢測人員要求高，耗時長，不利于推廣應用。酶聯免疫吸附法檢測需多步洗板步驟，相對耗時較長，難以提高操作自動化程度，，酶催化反應，對溫度的要求較高，試劑盒的穩定性較差。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供一種檢測安定的磁顆粒化學發光試劑盒，采用該試劑盒進行安定殘留的檢測時不僅具備較高的靈敏度，特異性，而且具有較高的反應速度。

本發明的另一個目的在于提供一種安定殘留的測試方法，該方法操作簡單，靈敏度高，特異性好。

實現上述目的，本發明提供一種安定殘留檢測試劑盒，其包含的主要試劑有：發光標記物、熒光素標記物、標準品、質控品、分離試劑。

所述的分離試劑是包被有羊抗FITC抗體的順磁性納米微珠。

所述的順磁性納米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH₂活性基團的微珠，用于包被羊抗FITC單克隆抗體，其內芯是Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃，使得微珠具有順磁性。

所述的發光標記物是異魯米諾衍生物標記的安定殘留半抗原。所述的異魯米諾衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。

所述的試劑盒還包括標準品，質控品和濃縮洗液。

所述的熒光素標記物是FITC標記安定殘留單克隆抗體。

本發明還提供一種利用試劑盒檢測安定殘留的方法，包括下列步驟：

1)分別吸取20μl-100μl標準品或樣本，然后加入20μl-100μl發光標記物，再加20μl-100μl熒光素標記物，充分混勻后，37℃溫育15min；

2)加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80-150μl，混勻后在37℃溫育5min；

3)用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300-500μl沖洗復合物沉淀；

4)上述清洗步驟重復2-4次；

5)4)所得分離好的復合物直接放入測量暗箱，加入激發底物1和激發底物2，延遲3-5s后檢測發出的相對光強度(RLU)，樣本中的含量與RLU成一定比例關系，可以通過RLU集合標準曲線法計算安定殘留的濃度。

所述的發光底物的主要成分是NaOH和H₂O₂。

本發明中分析測試方法所用的分析儀是：包括電源電路、自動注射泵1和2、測量室、發光室、光電倍增管計數器和輸出系統，同時還配置有計算機與中文界面的Windows控制軟件，可進行資料錄入、結果匯總、質量控制、結果儲存和結果查詢等功能，可完成多種分析模式的編程，定量或定性報告結果，自動生成并儲存、更新功能，兩點自動修正標準曲線，所采用的系統是CI-2008系統。

本發明所述的分離試劑是包被羊抗FITC單克隆抗體，其表面基團的含量是0.1-0.3eqm/g，其保存于3-5％卵清蛋白，0.1-0.2％Tween-20，0.2％NaN₃，pH7.2-7.6的PBS緩沖液中。所述的FITC是異硫氰酸熒光素。所述百分含量為質量百分含量。

所述的發光標記物是異魯米諾衍生物ABEI、AHEI或ABEN標記的安定半抗原，其保存于含pH7.2-7.6，0.1-0.3％Tween-20，0.1％NaN₃的PBS緩沖液中。所述百分含量是質量百分含量。

所述的熒光素標記物是FITC標記的安定單克隆抗體，其保存于pH7.2-7.6，含3-5％卵清蛋白，0.2％NaN₃的PBS緩沖液。所述百分含量為質量百分含量。