[發明專利]檢測雌二醇的磁顆粒化學發光試劑盒及其應用

無效

• 申請號: 201110227587.6
• 申請日: 2011-08-09
• 公開（公告）號: CN102928415A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 馮才偉;羅曉琴;馮才茂;余厚美;劉福林;崔廷婷
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/577;G01N33/532;G01N33/543
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技術領域

本發明涉及一種化學發光檢測試劑盒及其測試方法，具體的涉及一種檢測動物組織、飼料、尿液等樣品中雌二醇的磁顆粒化學發光檢測試劑盒。?

背景技術

雌二醇(Estradiol，E2)是應用廣泛的甾類同化激素，被大量用于促進反芻類動物的生長，因其可以促進動物及提高畜禽瘦肉比，在禽獸養殖業曾經應用。但由于雌二醇可在動物組織內高殘留，通過食物鏈危害人類健康，是女性兒童提前發育，男性兒童乳腺發育呈女性化；男性生殖系統發育異常或引起病變；并導致女性乳腺癌和子宮內膜異位癥發生率上升，且雌二醇存在明顯的致癌性，歐美等發達國家已相繼禁止或嚴格禁止使用。中華人民共和國國務院第226號文件，《飼料和飼料添加劑管理條例》中規定雌二醇在飼料中不得檢出。?

目前，雌二醇的檢測方法常見的有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜質譜法(GC-MS)和酶聯免疫法(ELISA)等。?

1、高效液相色譜法(HPLC)具有檢測精度高、假陽性率低的特點。HPLC法的主要缺點是儀器價格昂貴，操作比較繁瑣，耗時長，檢測費用昂貴，對檢測人員專業要求較高，樣本前處理較復雜。?

2、氣相色譜-質譜法(GC-MS)靈敏度很高，假陽性率低。該方法的主要缺點是樣品需要衍生化這樣復雜的前期處理。雖然經過衍生化處理的樣品能在質譜中給出更多的結構信息，但是衍生化會產生多個不同的產物并導致樣品的部分丟失，造成實驗結果的偏差。?

3、酶聯免疫法(ELISA)是20世紀70年代出現，用于微量物質的檢測，最早應用于傳染病、腫瘤標志物、激素水平等臨床檢測，90年代開始在我國食品安全檢測領域推廣應用，目前依托ELISA技術的試劑盒、試紙條已經成為食品安全快速檢測領域的主導產品，同時也是我公司研發和銷售的主要產品類型。?酶聯免疫檢測法基于抗原-抗體的特異性反應，檢測靈敏度較高、特異性較好，技術操作簡易，容易掌握，確實解決了大量的以前難以解決的許多微量小分子物質如抗生素、激素、農藥殘留等的定性、定量分析工作，對食品安全快速檢測技術的發展起到了積極的促進作用。但是，ELISA方法存在許多自身無法克服的缺陷，主要表現在：?

1)非均相反應：檢測過程中為分離游離物與結合物，需要多步洗板過程，耗時費力，難以提高操作的自動化程度。?

2)酶催化反應：借助酶催化底物顯色，測定反應液吸光度值。反應的時間與溫度對酶活力存在較大影響，試劑穩定性。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供一種檢測雌二醇藥物的磁顆粒化學發光試劑盒，采用該試劑盒進行雌二醇藥物的檢測時不僅具備較高的靈敏度，特異性，而且具有較高的反應速度。?

本發明的另一個目的在于提供一種雌二醇藥物的測試方法，該方法操作簡單，靈敏度高，特異性好。?

實現上述目的，本發明提供一種雌二醇藥物檢測試劑盒，其包含的主要試劑有：發光標記物、熒光素標記物、標準品、質控品、分離試劑。?

所述的分離試劑是包被有羊抗FITC抗體的順磁性納米微珠。?

所述的順磁性納米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH₂活性基團的微珠，用于包被羊抗FITC單克隆抗體，其內芯是Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃，使得微珠具有順磁性。?

所述的發光標記物是異魯米諾衍生物標記的雌二醇半抗原。所述的異魯米諾衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。?

所述的試劑盒還包括標準品，質控品和濃縮洗液。?

所述的熒光素標記物是FITC標記雌二醇單克隆抗體。?

本發明還提供一種利用試劑盒檢測雌二醇的方法，包括下列步驟：?

1)分別吸取20μl-100μl標準品或樣本，然后加入20μl-100μl發光標記物，再加20μl-100μl熒光素標記物，充分混勻后，37℃溫育15min；?

2)加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80-150μl，混勻后在37℃溫育5min；?

3)用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300-500μl沖洗復合物沉淀；?

4)上述清洗步驟重復2-4次；?

5)4)所得分離好的復合物直接放入測量暗箱，加入激發底物1和激發底物2，延遲3-5s后檢測發出的相對光強度(RLU)，樣本中的含量與RLU成一定比例關系，可以通過RLU集合標準曲線法計算雌二醇的濃度。?