[發明專利]煙酰胺腺嘌呤二核苷酸營養缺陷型大腸桿菌的構建及其應用

無效

• 申請號: 201110227540.X
• 申請日: 2011-08-09
• 公開（公告）號: CN102925398A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 趙宗保;周雍進;林心萍;張素芳
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12Q1/02;C12R1/19
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)營養缺陷型的埃希氏菌屬(Escherichia)微生物，其構建過程如下，

1)將一種表達NAD跨膜轉運蛋白編碼基因的可自我復制的載體導入埃希氏菌屬微生物細胞內；

2)采用基因敲除和/或基因斷裂的方法使埃希氏菌屬微生物基因組中編碼煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉移酶的基因nadD、編碼NAD合酶的基因nadE中的一種或兩種失活。

2.按照權利要求1所述的微生物，其特征在于：所述NAD跨膜轉運蛋白編碼基因是衣原體的基因ntt4(NCBI?GeneID：2780098)、或酵母的基因ScNDT1(NCBI?GeneID：854811)、或酵母的ScNDT2(NCBI?GeneID：856712)、或擬南芥的基因AtNDT1(NCBI?GeneID：819362)、或擬南芥的AtNDT2(NCBI?GeneID：839124)、或它們的具有相似功能的突變基因。

3.按照權利要求1所述的微生物，其特征在于：其生長依賴于培養環境中存在的NAD或其還原態化合物NADH、或煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)或其還原態化合物NADPH中的一種或多種組合。

4.按照權利要求1、2或3所述的微生物，其特征在于：該微生物為保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)的菌株大腸埃希氏菌E.coli?YJE003，保藏編號：CGMCC?4988；保藏時間：2011年6月24日；保藏地點：北京市朝陽區北辰西路1號院3號；

或該微生物為保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)的大腸埃希氏菌E.coli?YJE004，保藏編號：CGMCC?4989；保藏時間：2011年6月24日；保藏地點：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

5.一種權利要求1、2、3或4所述微生物的應用，其特征在于：所述微生物生長培養時，通過在埃希氏菌屬微生物培養基中添加總濃度為0.005mmo?l/L?10mmol/L的吡啶核苷酸輔酶，調控胞內吡啶核苷酸輔酶的濃度，改善細胞的代謝行為，進而獲得一種或多種埃希氏菌屬微生物代謝物產量。

6.一種權利要求1、2、3或4所述微生物的應用，其特征在于：所述微生物生長培養時，通過在埃希氏菌屬微生物培養基中添加終濃度分別為0.005mmol/L?10mmol/L的吡啶核苷酸輔酶和待篩選的化合物，通過觀測該微生物的生長速度變化，獲知被篩選的化合物對NAD跨膜轉運蛋白的抑制性能。

7.一種權利要求1、2、3或4所述微生物的應用，其特征在于：所述微生物通過下述方式之一，應用于蛋白質表達：1)向所述微生物導入攜帶表達特定蛋白質編碼基因的可自我復制的載體，或，2)向所述微生物導入攜帶表達特定蛋白質編碼基因并且表達nadD基因或nadE基因的可自我復制的載體。