[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)四環(huán)素類(lèi)藥物的磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒及其應(yīng)用

無(wú)效

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• 申請(qǐng)日: 2011-08-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102928413A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何方洋;馮才偉;孫震;劉福林;趙正苗;張?zhí)m娟
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京勤邦生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/76
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/76;G01N33/577
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種化學(xué)發(fā)光試劑盒及其測(cè)試方法，特別是檢測(cè)水產(chǎn)、組織、牛奶、雞蛋、腎臟、肝臟、蜂王漿等樣本中四環(huán)素類(lèi)藥物殘留量的磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒。?

技術(shù)背景

四環(huán)素類(lèi)藥物(Tetracyclines，TCs)是由鏈霉菌產(chǎn)生的一類(lèi)廣譜抗生素，在化學(xué)結(jié)構(gòu)上都屬于多環(huán)并四苯羧基酰胺母核的衍生物。在畜禽生產(chǎn)中，四環(huán)素類(lèi)藥物被廣泛作為藥物添加劑，用于防治腸道感染、促生長(zhǎng)和提高奶牛產(chǎn)奶量。同時(shí)也被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖和養(yǎng)蜂中預(yù)防和治療多種感染性疾病。?

但是由于四環(huán)素類(lèi)藥物主要以原型經(jīng)腎小球過(guò)濾排出，殘留藥物能沉積于骨及牙組織內(nèi)，與新形成的骨、牙所沉積的鈣相結(jié)合，導(dǎo)致牙齒持久成黃色，俗稱(chēng)“四環(huán)素牙”，使出生的幼兒乳牙釉質(zhì)發(fā)育不全并出現(xiàn)黃色沉積，引起畸形或生長(zhǎng)抑制。四環(huán)素類(lèi)藥物還在肝組織中富集，造成肝損害，還可造成過(guò)敏反應(yīng)、二重感染、致畸胎影響。同時(shí)四環(huán)素藥物殘留易誘導(dǎo)耐藥菌株。因此四環(huán)素類(lèi)藥物造成的食品殘留給人們身體健康帶來(lái)極大地隱患。?

在四環(huán)素類(lèi)藥物的檢測(cè)方面，目前最常用的方法包括高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等方法。儀器方法操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)、檢測(cè)費(fèi)用昂貴，對(duì)檢測(cè)人員專(zhuān)業(yè)要求較高，樣本前處理方法復(fù)雜，儀器本身的價(jià)格也比較昂貴，不利于推廣應(yīng)用，酶聯(lián)免疫吸附法是基于抗原-抗體的特異性反應(yīng)，檢測(cè)靈敏度高，特異性較好，技術(shù)操作簡(jiǎn)單，對(duì)食品安全快速檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展起到了積極的促進(jìn)作用，但是ELISA方法存在一些缺陷，如非均相反應(yīng)，需要多步洗板過(guò)程，難以提高操作的自動(dòng)化程度，酶催化反應(yīng)，對(duì)溫度的要求較高，試劑盒的穩(wěn)定性較差。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種四環(huán)素類(lèi)藥物檢測(cè)試劑盒，采用該試劑盒進(jìn)行四環(huán)素類(lèi)藥物的檢測(cè)時(shí)不僅具備較高的靈敏度，特異性，而且具有較高的反應(yīng)速度。?

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種四環(huán)素的測(cè)試方法，該方法操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，特異性好。?

實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種四環(huán)素類(lèi)藥物檢測(cè)試劑盒，其包含的主要試劑有：發(fā)光標(biāo)記物、熒光素標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、分離試劑。?

所述的分離試劑是包被有羊抗FITC抗體的順磁性納米微珠。?

所述的順磁性納米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH₂活性基團(tuán)的微珠，用于包被羊抗FITC單克隆抗體，其內(nèi)芯是Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃，使得微珠具有順磁性。?

所述的發(fā)光標(biāo)記物是異魯米諾衍生物標(biāo)記的四環(huán)素半抗原。所述的異魯米諾衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。?

所述的試劑盒還包括標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和濃縮洗液。?

所述的熒光素標(biāo)記物是FITC標(biāo)記四環(huán)素類(lèi)藥物單克隆抗體。?

本發(fā)明還提供一種利用試劑盒檢測(cè)四環(huán)素類(lèi)藥物的方法，包括下列步驟：?

1)分別吸取20μl-100μl標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，然后加入20μl-100μl發(fā)光標(biāo)記物，再加20μl-100μl熒光素標(biāo)記物，充分混勻后，37℃溫育15min；?

2)加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80-150μl，混勻后在37℃溫育5min；?

3)用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300-500μl沖洗復(fù)合物沉淀；?

4)上述清洗步驟重復(fù)2-4次；?

5)4)所得分離好的復(fù)合物直接放入測(cè)量暗箱，加入激發(fā)底物1和激發(fā)底物2，延遲3-5s后檢測(cè)發(fā)出的相對(duì)光強(qiáng)度(RLU)，樣本中的含量與RLU成一定比例關(guān)系，可以通過(guò)RLU集合標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算四環(huán)素類(lèi)藥物的濃度。?

所述的發(fā)光底物的主要成分是NaOH和H₂O₂。?

本發(fā)明中分析測(cè)試方法所用的分析儀是：包括電源電路、自動(dòng)注射泵1和2、測(cè)量室、發(fā)光室、光電倍增管計(jì)數(shù)器和輸出系統(tǒng)，同時(shí)還配置有計(jì)算機(jī)與中文?界面的Windows控制軟件，可進(jìn)行資料錄入、結(jié)果匯總、質(zhì)量控制、結(jié)果儲(chǔ)存和結(jié)果查詢等功能，可完成多種分析模式的編程，定量或定性報(bào)告結(jié)果，自動(dòng)生成并儲(chǔ)存、更新功能，兩點(diǎn)自動(dòng)修正標(biāo)準(zhǔn)曲線，所采用的系統(tǒng)是CI-2008系統(tǒng)。?