[發(fā)明專利]治療或預(yù)防癌癥的藥物

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110226905.7
• 申請日: 2008-09-07
• 公開（公告）號: CN102274503A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葛輝
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州愛生基因有限公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標事務(wù)所有限公司 32103
• 代理人: 孫仿衛(wèi);汪青

本發(fā)明是申請日為2008年9月7日、申請?zhí)枮?00810160891.1、名稱為“治療或預(yù)防癌癥的方法和藥物”的中國發(fā)明專利申請的分案申請。?

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及治療或預(yù)防癌癥的方法和藥物以及抗癌藥物篩選方法。?

背景技術(shù)

人轉(zhuǎn)錄正輔因子4(PC4，也稱p14、p15、Sub1的同源類似物等)是一種單鏈DNA結(jié)合蛋白，這種蛋白由127個氨基酸殘基組成且靠近N-端有數(shù)個絲氨酸富集區(qū)。PC4已被克隆并鑒定為一種能通過與許多序列特異性和細胞特異性調(diào)節(jié)子直接作用來介導(dǎo)許多基因的轉(zhuǎn)錄活化的通用正輔因子(參見文獻Ge等，Cell(1994)78：513-523；Kretzschmar，M.等，Cell(1994)78：525-534)。PC4直接作用的這些調(diào)節(jié)子包括許多核激素受體、腫瘤抑制子、癌蛋白、以及腫瘤的發(fā)生過程和其他人類疾病的病變過程中所必須的重要因子。?

腫瘤抑制蛋白P53直接與PC4蛋白在轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生相互作用，從而控制了PC4的表達。另外，PC4作為P53的唯一激活子可以調(diào)節(jié)許多參與細胞周期、凋亡、DNA修復(fù)和其他細胞應(yīng)答的基因的轉(zhuǎn)錄(參見文獻Kishore?A.H.等，Biochem.J.(2007)BJ20070390；Banerjee，S.等，Mol.Cell?Biol.(2004)24：2052-2062)。PC4的活性受到翻譯后修飾的進一步調(diào)節(jié)，該翻譯后修飾的類型至少包括磷酸化修飾和乙酰化修飾。PC4被磷酸化修飾之后，其與目標激活因子作用的活性被抑制且能反向介導(dǎo)其輔激活因子的功能。質(zhì)譜分析結(jié)果表明：體內(nèi)的PC4超磷酸化修飾主要由酪蛋白激酶II介導(dǎo)且僅發(fā)生在N-端絲氨酸富集區(qū)(參見文獻Ge等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1994)91：12691-12695)。PC4的乙酰化修飾由P300介導(dǎo)且受到磷酸化修飾的抑制(Kumor，P.B.R.等，J.Biol.Chem.(2001)276：16804-16809)。?

到目前為止，大家還不清楚PC4在調(diào)節(jié)基因中所起的作用是否與癌癥或腫瘤的發(fā)生有關(guān)。?

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明人采用了包括爪蟾卵母細胞系、人體組織、其他哺乳動物細胞系在內(nèi)?的不同的模式生物體系，驚奇地發(fā)現(xiàn)PC4具有癌蛋白的功能且在細胞分化、腫瘤發(fā)育和病變的過程中起重要作用，見圖10示出的PC4的多種功能，所有這些功能，尤其是圖10中標注下劃線的功能，都與癌癥發(fā)病機理相關(guān)或者是癌癥發(fā)病的基礎(chǔ)。特別是，發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)在很多惡性腫瘤組織中，如在肺癌組織、膀胱癌組織、結(jié)腸癌組織、乳腺癌組織、子宮內(nèi)膜癌組織、甲狀腺癌組織、小腸癌組織中，都發(fā)現(xiàn)PC4在蛋白水平被活化。相反，在相應(yīng)的沒有經(jīng)歷過快速生長的正常組織中的PC4的蛋白水平?jīng)]有升高。在癌細胞系和其他轉(zhuǎn)化細胞系中還發(fā)現(xiàn)了PC4RNA水平的升高，但是在原代細胞系中并沒有發(fā)現(xiàn)。?

例如，發(fā)明人測定了非洲爪蟾的變態(tài)發(fā)育過程中的PC4的表達水平。測定方法如下：收集不同發(fā)育階段的非洲爪蟾的整體溶解產(chǎn)物，監(jiān)測每個溶解產(chǎn)物的蛋白含量，選取50ug每個階段溶解產(chǎn)物中的總蛋白，上SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進行分析，然后將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)到硝酸纖維膜上，最后進行蛋白印跡分析，即采用抗PC4的多克隆抗體來檢測被轉(zhuǎn)到硝酸纖維膜上的蛋白。測定結(jié)果如圖5A、圖5B和圖5C所示，PC4的表達水平與非洲爪蟾蜍變態(tài)發(fā)育過程相關(guān)，當前變態(tài)發(fā)育開始時，PC4在56～58這個階段被顯著活化。?

發(fā)明人通過轉(zhuǎn)染檢測實驗證明PC4與細胞死亡相關(guān)。將人PC4編碼區(qū)(野生型的或絲氨酸富集區(qū)突變型的人PC4編碼區(qū))與綠色熒光蛋白(GFP)的編碼區(qū)融合后，再亞克隆到包含有CMV啟動子哺乳動物表達載體(pcDNA3.1)中，再將得到合成載體瞬時轉(zhuǎn)染到HeLa細胞(參見Ge等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1994)91：12691-12695)。轉(zhuǎn)染后24小時，在激光共聚焦顯微鏡下觀測樣本，能觀察到PC4在轉(zhuǎn)染的HeLa細胞中所起的作用。結(jié)果如圖6A、圖6B、圖6C所示，圖6A是對照組(未轉(zhuǎn)染的HeLa細胞)的熒光檢測結(jié)果，圖6B是轉(zhuǎn)染了野生型PC4的HeLa細胞的熒光檢測結(jié)果，圖6C是轉(zhuǎn)染了N-端絲氨酸區(qū)突變型PC4(PC4-ΔS，其不能被磷酸化，所以應(yīng)該是完全活化的)的HeLa細胞的熒光檢測結(jié)果。三幅圖對比可以看出，PC4位于細胞核中且能夠?qū)е氯旧w凝集和細胞凋亡，尤其是從圖6C可以判斷PC4的過量表達引發(fā)了凋亡，這一點與癌蛋白的作用是一致的。?