[發明專利]一種委陵菜多糖的制備方法

無效

• 申請號: 201110225944.5
• 申請日: 2011-08-09
• 公開（公告）號: CN102268100A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發明（設計）人: 劉東鋒;吳艷波
• 申請（專利權）人: 南京澤朗醫藥科技有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;C12S3/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于天然產物分離領域，尤其是涉及一種多糖的制備方法，具體是涉及一種采用大孔樹脂純化委陵菜多糖的方法。

背景技術

多糖(Polysaccharide)是由單糖之間脫水形成糖苷鍵，并以糖苷鍵線性或分枝連接而成的鏈狀聚合物。多糖種類繁多、結構復雜、具有特殊生物學活性，生物體內多糖的研究可追溯到上世紀30年代。到目前已有300多種多糖類化合物從天然產物中提取分離出來，從中藥中提取的水溶性多糖具有無細胞毒性，分子量通過化學手段易控制等特點，加之實驗證明多糖與感染、腫瘤、炎癥及一些自身免疫性疾病的治療有關，已成為新藥開發研究的發展方向之一。

委陵菜多糖（Potentilla?AnserinePolysaccharide，PAP）是由薔薇科委陵菜屬鵝絨委陵菜（Potentilla?Anserine?L.）中提取分離得到的。委陵菜中含有糅質、糖類、蛋白質、脂肪酸及委陵菜苷等。現代藥理研究表明，其水提物具有提高機體免疫力、抗疲勞、耐缺氧和止瀉抑菌的作用。委陵菜在青海、甘肅、西藏等高海拔地區廣泛分布，有“人參果”的美譽。此外，劉素君等研究表明委陵菜多糖具有抗腫瘤作用，且其抗腫瘤作用和其免疫調節作用有明顯的相關性，由此推斷委陵菜多糖的抗腫瘤作用可能與激活體內免疫系統有關。

委陵菜多糖是鵝絨委陵菜的主要活性成分之一，從該植物中提取分離多糖成分的技術已有陸續報道。多是采用有機溶劑萃取等方法制備，后續處理麻煩，且存在毒性有機溶劑殘留問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種委陵菜多糖的制備方法，該方法操作簡單，提取率高，產品含量高，品質好，活性強。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

一種委陵菜多糖的制備方法，其特征在于：以委陵菜全草為原料，加入蒸餾水攪拌，保溫浸泡12-24h后，補加水至料液比為1:10-1:20，再進行微波多次提取，得到提取液，提取液濃縮至小體積，加酸調pH至5-6，加入淀粉酶和蛋白酶進行酶解反應，酶解液經過大孔樹脂除雜，過柱液再采用醇沉或透析法純化，最后沉淀物用95%乙醇、無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，揮去乙醚，干燥得到高純度委陵菜多糖。

所述的淀粉酶和蛋白酶，酶的加入量為濃縮液量的2-5‰，酶解條件為：時間5-10h，溫度40-45℃。

所述的大孔樹脂為非極性大孔樹脂，可選用D101、HZ802、XAD-16等型號中的一種。

所述的醇沉操作為，向過柱液中緩緩加入95%乙醇，使醇濃度達45%～60%，冷藏過夜，離心收集沉淀。

所述的透析純化步驟為，過柱液經過截留分子量2000的超濾膜截留多糖，再采用5-20倍量60~85%乙醇液透析1~3次，收集截留液，濃縮干燥得沉淀物。

所述的干燥步驟可采用冷凍干燥或噴霧干燥。

本發明的優勢在于：采用微波提取結合酶水解法純化委陵菜多糖，與傳統水提法相比，不需要高溫、縮短了操作時間，提高了生產效率，且節約了能耗，脫蛋白效率高；采用大孔樹脂吸附非極性雜質，減少有毒有機溶劑應用，所得產品質量好，活性高。

下面將結合具體實施方式進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式

實施例1：

將鵝絨委陵菜破碎，稱取1kg置于提取器中，加2L蒸餾水充分攪勻，保溫浸泡12小時，補加水至料液比為1:15，微波提取1小時，反復提取4次，過濾，合并提取液，濃縮至500ml，加酸調pH至5，按淀粉酶：蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制劑，加入1g，在45℃溫度下反應6小時，將酶解液通過HZ802大孔吸附樹脂柱，透過液緩緩加入95%乙醇，使醇濃度達60%，冷藏過夜，離心15分鐘，收集沉淀物用95%乙醇、無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，揮去乙醚，噴霧干燥得到高純度委陵菜多糖得到25.6g。

實施例2：

將鵝絨委陵菜破碎，稱取1kg置于提取器中，加5L蒸餾水充分攪勻，保溫浸泡18小時，補加水至料液比為1:20，微波提取1.5小時，反復提取2次，過濾，合并提取液，將提取液濃縮至500ml，加酸調pH至6，按淀粉酶：蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制劑，加入2.5g，在40℃溫度下反應5小時，將酶解液通過D101大孔吸附樹脂柱，透過液緩緩加入95%乙醇，使醇濃度達45%，冷藏過夜，離心15分鐘，收集沉淀物用95%乙醇、無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，揮去乙醚，噴霧干燥得到高純度委陵菜多糖得到21.9g。

實施例3：