[發(fā)明專利]從關(guān)節(jié)軟骨中提取RNA的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110225851.2 | 申請日： | 2011-08-08 |
| 公開（公告）號： | CN102250887A | 公開（公告）日： | 2011-11-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 劉軍;王平;顧烽;顧大年;李則孝 | 申請（專利權(quán)）人： | 劉軍;王平;顧烽 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 宜興市天宇知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 32208 | 代理人： | 史建群 |
| 地址： | 214203 江蘇省無錫市宜*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 關(guān)節(jié) 軟骨 提取 rna 方法 | ||
1.從關(guān)節(jié)軟骨中提取RNA的方法，其特征在于將軟骨組織在-20℃及以下冷凍用粉碎機粉碎成粉末狀；在粉碎的軟骨組織中加入復(fù)合變性液制成勻漿，離心收集上清液；加入聚乙二醇辛基苯基醚蛋白變性劑，使其濃度為0.25-0.35%?V/V，冰浴冷卻，用苯酚-氯仿-異戊醇混合溶劑多次抽提上清液；加入乙酸銨或乙酸鈉，然后用異丙醇或乙醇沉淀RNA；對沉淀物用RNA純化藥盒進一步純化。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述從關(guān)節(jié)軟骨中提取RNA的方法，其特征在于冷凍為在液氮中進行。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述從關(guān)節(jié)軟骨中提取RNA的方法，其特征在于粉碎用粉碎機為Spex?Industries公司產(chǎn)的?Spex?Freezer?Mill粉碎機。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述從關(guān)節(jié)軟骨中提取RNA的方法，其特征在于復(fù)合變性液為由0.1-0.15?M三羥甲基氨基甲烷，pH7.0-7.5;?20-25?mM乙二胺四乙酸，pH?7.0-7.5;?0.5-0.6微升/毫升巰基乙醇；3.5-4.5?M?硫氰酸胍組成的復(fù)合硫氰酸胍溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述從關(guān)節(jié)軟骨中提取RNA的方法，其特征在于RNA純化藥盒為QIAGEN產(chǎn)的Rneasy。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述從關(guān)節(jié)軟骨中提取RNA的方法，其特征在于加入乙酸銨或乙酸鈉至最終濃度為0.3-0.5M。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4、5或6所述從關(guān)節(jié)軟骨中提取RNA的方法，其特征在于所得RNA?的260μm紫外吸收值/280μm紫外吸收值的比值≥2。
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