[發(fā)明專利]丙烯酰賴氨酸翻譯系統(tǒng)及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110225152.8
• 申請(qǐng)日: 2011-08-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102925427A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王江云;李發(fā)慧;孫云;潘延超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/00
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/00;C12N1/21;C12N5/10;C12N15/70;C12N15/85;G01N33/68;A61K49/00;C12Q1/02;C12R1/01;C12R1/19
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 王旭

1.一種丙烯酰賴氨酸翻譯系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包含：

(i)丙烯酰賴氨酸；

(ii)正交丙烯酰賴氨酸氨酰tRNA合成酶，其含有的氨基酸序列選自由SEQ?ID?NO：2所示氨基酸和它們的保守性變體構(gòu)成的組；

(iii)正交tRNA，其包含SEQ?ID?NO：1所示的多核苷酸序列；其中所述正交丙烯酰賴氨酸氨酰tRNA合成酶用所述丙烯酰賴氨酸優(yōu)先氨酰化所述正交tRNA；和

(iv)編碼目標(biāo)蛋白質(zhì)的核酸，其中所述核酸含有所述正交tRNA特異性識(shí)別的至少一個(gè)選擇密碼子。

2.如權(quán)利要求1所述的翻譯系統(tǒng)，其特征在于，所述正交tRNA是琥珀抑制型tRNA，并且所述選擇密碼子是琥珀密碼子。

3.如權(quán)利要求1所述的翻譯系統(tǒng)，其還包含編碼正交丙烯酰賴氨酸氨酰tRNA合成酶的核苷酸序列。

4.一種宿主細(xì)胞，其包含所述正交tRNA序列和編碼所述正交丙烯酰賴氨酸氨酰tRNA合成酶的核苷酸序列。

5.如權(quán)利要求4所述的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是真細(xì)菌細(xì)胞，或哺乳動(dòng)物細(xì)胞，優(yōu)選大腸桿菌細(xì)胞和中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞。

6.一種產(chǎn)生在至少一個(gè)所選位置定點(diǎn)特異性摻入丙烯酰賴氨酸的突變蛋白質(zhì)的遺傳方法，所述方法包括下述步驟：

(a)提供權(quán)利要求1所述的丙烯酰賴氨酸翻譯系統(tǒng)，該系統(tǒng)包含：

(i)丙烯酰賴氨酸；

(ii)正交丙烯酰賴氨酸氨酰tRNA合成酶，其含有的氨基酸序列選自由SEQ?ID?NO：2所示氨基酸和它們的保守性變體構(gòu)成的組；

(iii)正交tRNA，其包含SEQ?ID?NO：1所示的多核苷酸序列；其中所述正交丙烯酰賴氨酸氨酰tRNA合成酶用所述丙烯酰賴氨酸優(yōu)先氨酰化所述正交tRNA；和

(iv)編碼所述目標(biāo)蛋白質(zhì)的核酸，其中所述核酸在所選的位置包含所述正交tRNA特異性識(shí)別的至少一個(gè)選擇密碼子；和

(b)將編碼所述目標(biāo)蛋白質(zhì)的核酸轉(zhuǎn)化到權(quán)利要求4所述的宿主細(xì)胞中，在所述蛋白質(zhì)的翻譯期間，丙烯酰賴氨酸氨酰化的正交tRNA對(duì)所述選擇密碼子起反應(yīng)而將培養(yǎng)基中的丙烯酰賴氨酸摻入所述目標(biāo)蛋白質(zhì)的所述所選位置，從而產(chǎn)生在所選位置含丙烯酰賴氨酸的所述突變目標(biāo)蛋白質(zhì)。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述正交tRNA是琥珀抑制型tRNA，并且所述選擇密碼子是琥珀密碼子。

8.由權(quán)利要求6所述的方法獲得的含有至少一個(gè)丙烯酰賴氨酸的突變蛋白質(zhì)。

9.由權(quán)利要求6所述的方法獲得的含有至少一個(gè)丙烯酰賴氨酸的突變蛋白質(zhì)的應(yīng)用，所述突變蛋白質(zhì)中的丙烯酰賴氨酸在光引發(fā)下通過(guò)與含有四唑官能團(tuán)的化合物特異反應(yīng)，從而交聯(lián)化學(xué)活性熒光基團(tuán)，用于在體內(nèi)或體外有效地標(biāo)記蛋白，或用于活體細(xì)胞成像。

10.權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其用于真細(xì)菌細(xì)胞、或哺乳動(dòng)物細(xì)胞的活體細(xì)胞成像。