[發(fā)明專利]一種測(cè)定磷酸-5’-吡哆醛含量的高效液相色譜分析方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110224734.4
• 申請(qǐng)日: 2011-08-05
• 公開（公告）號(hào): CN102323350A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬駿;陳浩云;胡鳴;倪傳紅;施虹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 上海開祺知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31114
• 代理人: 費(fèi)開逵

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種測(cè)定磷酸-5’-吡哆醛含量的高效液相色譜分析方法。

背景技術(shù)

磷酸-5’-吡哆醛又稱磷酸吡醛素、吡哆醛-5-磷酸酯、輔脫羧酶，是維生素B6的輔酶形式(轉(zhuǎn)氨酶、脫羧酶和消旋酶的酶)，參與氨基酸代謝中的轉(zhuǎn)氨基作用，它主要用于生化研究，孕甾酮特性的結(jié)構(gòu)修飾，酶抑制劑。

磷酸-5’-吡哆醛的結(jié)構(gòu)式如下：

在醫(yī)藥方面，磷酸-5’-吡哆醛是維生素B6的主體藥物原料?，F(xiàn)有技術(shù)中未見測(cè)定磷酸-5’-吡哆醛含量的高效液相色譜分析方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種測(cè)定磷酸-5’-吡哆醛含量的高效液相色譜分析方法，以填補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)磷酸-5’-吡哆醛定量檢測(cè)的空白。

本發(fā)明所述的測(cè)定磷酸-5’-吡哆醛含量的高效液相色譜分析方法，包括以下步驟：

1)采用反相高效液相色譜法，其高效液相色譜條件如下：

色譜柱：C₁₈，5μm，250×4.6mm(I.D.)，

流動(dòng)相組成：乙腈∶水＝30-10∶70-90(v/v)，優(yōu)選乙腈∶水＝30∶70(v/v)，并以磷酸氫二鈉緩沖液調(diào)節(jié)pH值＝6，

流速：1.0ml/min，

柱溫：30℃，

檢測(cè)波長(zhǎng)：388nm，

進(jìn)樣體積：10.0μl。

2)配制磷酸-5’-吡哆醛標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品溶液：用二極管陣列檢測(cè)器在340-500nm之間進(jìn)行連續(xù)掃描，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定峰面積，計(jì)算樣品主成分含量。

按照本發(fā)明方法，是將測(cè)定主成分含量的進(jìn)樣樣品用水稀釋成0.2mg/ml后，再測(cè)定磷酸-5’-吡哆醛的含量。

有益效果：

1)本發(fā)明采用C₁₈反相色譜柱，以高效液相色譜分析方法準(zhǔn)確測(cè)定磷酸-5’-吡哆醛的含量，并用水溶解樣品，確保了溶液的穩(wěn)定性；

2)進(jìn)樣體積為10.0μl，柱溫為30℃，提高了色譜峰的對(duì)稱性；

3)本發(fā)明方法能快速測(cè)定磷酸-5’-吡哆醛的含量，為確保磷酸-5’-吡哆醛產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供了可靠的檢測(cè)數(shù)據(jù)。

附圖說(shuō)明

圖1為磷酸-5’-吡哆醛的紫外光譜圖。

圖2為流動(dòng)相組成為乙腈∶水＝10∶90(v/v)，pH＝6時(shí)的色譜圖。

圖3為流動(dòng)相組成為乙腈∶水＝20∶80(v/v)，pH＝6的色譜圖。

圖4為流動(dòng)相組成為乙腈∶水＝30∶70(v/v)，pH＝6時(shí)的色譜圖。

圖5為磷酸-5’-吡哆醛的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但實(shí)施例并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

1、實(shí)驗(yàn)儀器及色譜條件

Waters?1525型高效液相色譜儀，Waters?717plus自動(dòng)進(jìn)樣器，配Waters2996型二極管陣列(PDA)檢測(cè)器，色譜分離系統(tǒng)的控制和記錄由Waters?Empower色譜管理系統(tǒng)完成。其色譜條件如下：

色譜柱：C₁₈，5μm，250×4.6mm(I.D)

流動(dòng)相組成：乙腈∶水＝10-30∶70-90(v/v)，并以磷酸氫二鈉緩沖液控制pH值＝6；

流速：1.0ml/min

柱溫：30℃

檢測(cè)波長(zhǎng)：388nm

2、試劑與藥品

磷酸-5’-吡哆醛對(duì)照品(＞99.0wt％)

乙腈：HPLC級(jí)

磷酸-5’-吡哆醛樣品

實(shí)驗(yàn)中流動(dòng)相和溶液用水均為二次石英蒸餾水。

實(shí)施例1色譜條件的選擇

1)檢測(cè)波長(zhǎng)

用二極管陣列檢測(cè)器在340-500nm進(jìn)行連續(xù)掃描，即得到磷酸-5’-吡哆醛的紫外吸收光譜圖，參看圖1。由圖1可知，磷酸-5’-吡哆醛在388nm附近有最大吸收，因此選擇388nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2)樣品濃度

測(cè)定主成分含量時(shí)，樣品溶液濃度過(guò)大會(huì)導(dǎo)致主峰超出線性范圍使其定量不準(zhǔn)。經(jīng)試驗(yàn)，本發(fā)明采用將進(jìn)樣樣品用水先溶解稀釋成0.2mg/ml后，再測(cè)定磷酸-5’-吡哆醛的含量。

3)流動(dòng)相組成