[發明專利]一種檢測豬博卡病毒(PBoV)的LAMP試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201110223258.4
• 申請日: 2011-08-04
• 公開（公告）號: CN102912033A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 李帥偉;付仁一
• 申請（專利權）人: 廣州格拉姆生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測豬博卡病毒(PBoV)的LAMP試劑盒，其特征在于，其包含用無菌雙蒸水配制的LAMP反應試劑，每個反應加入24μL?LAMP反應試劑，其中LAMP反應液24μL包含的組分及濃度分別為：10U的BstDNA聚合酶，2.5μL的聚合酶緩沖液，150mmol的MgSO₄，25mmol的甜菜堿，30mmol的dNTP，5pmol的引物P1，5pmol的引物P2，40pmol的引物P3，40pmol的引物P4，其中各引物序列分別為：

P1：CCAATCTGGCCAAGAGCAT，

P2：CGGCAACAGCATAGAGTCC，

P3：CCACACGATCAGCTTGGCCGGCTATACGGCTGCGTGAAC，

P4：TGGGAAGAAGCGCTGATGCAC-TCGGTCGATCCTGAACTCG。

2.根據權利要求1所述的檢測豬博卡病毒(PBoV)的LAMP試劑盒，其特征在于，所述聚合酶緩沖液由以下組分制成：pH?8.8的200mM?Tris-HCl，100mM?KCl，100mM(NH₄)₂SO₄，以及1％Triton?X-100。

3.一種檢測豬博卡病毒(PBoV)的LAMP試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)從NCBI數據庫Genbank中查找PBoV序列，運用序列比對軟件DNAstar進行同源性分析，獲得PBoV的保守靶序列；

2)根據步驟1)獲得的序列運用PrimerExplore?V4在線引物設計軟件進行引物設計，選取保守序列區作為構建試劑盒所使用引物，引物序列分別為：

P1：CCAATCTGGCCAAGAGCAT，

P2：CGGCAACAGCATAGAGTCC，

P3：CCACACGATCAGCTTGGCCGGCTATACGGCTGCGTGAAC，

P4：TGGGAAGAAGCGCTGATGCAC-TCGGTCGATCCTGAACTCG；

3)將步驟2)所設計的引物進行合成，運用無菌雙蒸水配制LAMP反應試劑，其中LAMP反應液24μL包含的組分及濃度分別為：10U的BstDNA聚合酶，2.5μL的聚合酶緩沖液，150mmol的MgSO₄，25mmol的甜菜堿，30mmol的dNTP，5pmol的引物P1，5pmol的引物P2，40pmol的引物P3，以及40pmol的引物P4。

4.一種檢測豬博卡病毒(PBoV)的LAMP試劑盒的制備方法，其特征在于，所述聚合酶緩沖液由以下組分制成：pH?8.8的200mM?Tris-HCl，100mMKCl，100mM(NH₄)₂SO₄，以及1％Triton?X-100。