[發明專利]一種適用于番茄內標準基因的核酸檢測靶序列及其應用無效

申請號：	201110223035.8	申請日：	2011-08-04
公開（公告）號：	CN102321744A	公開（公告）日：	2012-01-18
發明（設計）人：	周曉紅;麥榮嘉;陳曉光;周倫彬;胡良勇	申請（專利權）人：	南方醫科大學
主分類號：	C12Q1/68	分類號：	C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/63;C12N1/21;C12R1/19
代理公司：	廣州市天河廬陽專利事務所 44244	代理人：	胡濟元
地址：	510515 廣東***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種適用于番茄標準基因核酸檢測序列及其應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體涉及一種番茄的核酸檢測方法。

背景技術

隨著轉基因作物及轉基因食品(genetically?modified?crops/food，GMCs/GMF)的產業化，其安全性問題逐漸受到廣泛關注，各國政府相繼出臺轉基因作物的系列法規、標準，用以規范GMCs/GMF的研發、生產、上市和貿易流通。歐盟、中國等實行GMCs/GMF的轉基因成分標識制度，對轉基因植物檢測技術的靈敏度和準確性提出了嚴格的要求。轉基因植物基體標準物質和核酸分子標準物質的研制，以及轉基因植物定性、定量檢測技術研究已成為當前的研究熱點，并逐步向國際標準化方向發展。番茄作為重要的GMCs/GMF之一，在我國已被列入第一批實施標識管理的農業轉基因生物(genetically?modified?organisms，GMOs)目錄，建立可與國際接軌的番茄轉基因成分標準化檢測手段，已是必需。目前國際上對轉基因番茄鑒定方法的研究仍處于起步階段，對番茄內標準基因的研究報道較少，仍有待研究。

內標準基因，是某種植物中具有種間特異性，種內非特異性，低拷貝數特征的一類基因。特定物種的內標準基因是區別其他物種的遺傳標志，可用于物種及其產品鑒別、轉基因成分檢測等諸多領域。內標準基因用于植物基因組DNA的質量或者拷貝數的定量分析，并且對于轉基因的定量檢測起著決定性的作用。沒有合適的內標準基因是不可能對于轉基因植物及其加工產品進行定量分析的，也不能確定轉基因植物及其加工產品的準確的轉基因含量。

尋找、鑒定適宜的內標準基因對轉基因作物的檢測而言至關重要。番茄內標準基因的研究較玉米、大豆、棉花等農作物略有滯后，國內外的相關報道不多。Mason等在2002年報道基于番茄apx基因(GenBank?Accession?No.Y16773)以qPCR方法可估算轉基因番茄插入外源基因的量值。深入鑒定具有高度番茄種特異性的內標準基因，進行拷貝數驗證及檢測體系的特異性、穩定性分析，以建設穩定的具有高度番茄種特異性的內標準檢測體系，仍是目前需要解決的重要問題。構建番茄內標準基因核酸檢測體系對轉基因番茄及其加工產品的定性、定量PCR檢測和其生產過程中外源基因拷貝數的測定方面發揮著極其重要的作用。其不但可以對番茄原料，而且對于如番茄醬、番茄飲品等難以從外觀上區分的番茄加工品進行定性的檢測。對于經過定性檢測呈陽性的樣品進一步的使用內標準基因為參照的定量PCR的檢測如篩選PCR檢測、基因特異性PCR檢測、構建特異性PCR檢測和品系特異性PCR檢測，最后通過外源目的基因的拷貝數和番茄內標準基因組拷貝數的比值獲得外源目的基因在樣品基因組DNA中的百分含量。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種穩定的具有高度番茄種特異性的核酸檢測靶標區域的番茄靶基因，該靶基因的拷貝數低且穩定，而且在種間高度特異，種內高度同源，適于作為番茄內標準基因。

本發明為解決上述技術問題的方案是：

一種適用于番茄內標準基因的核酸檢測靶序列，該靶序列的序列為，

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ATTAAGTGAA?ATCTGAATAT?ATGATTATAT?TAACCTTGCC

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