[發明專利]復合芽孢桿菌棉粕發酵劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201110221066.X
• 申請日: 2011-08-03
• 公開（公告）號: CN102352314A
• 公開（公告）日: 2012-02-15
• 發明（設計）人: 蘭時樂;王紅權;肖調義;趙玉蓉;金紅春;毛小偉
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00;C12N1/20;A23K1/16;A23K1/14;A23L1/015;C12R1/125;C12R1/07
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 何為;袁穎華

技術領域：

本發明屬于微生物發酵技術領域，涉及一種棉粕發酵劑的制備方法，特別涉及一種復合芽孢桿菌棉粕發酵劑的制備方法。

背景技術：

棉粕是棉籽榨油后的副產物，約占我國年產各種餅粕總量的30％左右。棉粕是一種優良的蛋白飼料資源，其產量大營養豐富。目前用作飼料原料的棉籽粕蛋白質含量一般為44.32％，僅次于豆粕的蛋白質含量49.48％，而高于菜籽粕的蛋白質含量36.04％。棉粕水解后可得到17種氨基酸，其中賴氨酸含量較低，為1.4-2.13％，而精氨酸含量較高，為3.94-4.98％，賴氨酸與精氨酸之比遠遠超過了100∶120的理想值。從8種必需氨基酸來看，棉籽蛋白與豆粕蛋白比較接近，從維生素和礦物質方面看，棉粕含有豐富的維生素E和B族維生素，磷含量為0.83-1.04％以上。因此，棉粕是重要的植物性蛋白質資源之一。但由于棉粕中含有對動物有害的游離棉酚，因而影響其飼用量，致使其在蛋白質原料中所占的比例并不是很高。

目前，國內對棉籽餅粕的脫毒主要是采用生物發酵脫毒法，使用的微生物種類因不同發酵工藝而有所不同。利用微生物發酵棉籽餅粕脫毒的基本原理是利用微生物在生長代謝過程中產生某些酶類降解棉籽餅粕中的游離棉酚，從而達到脫毒的目的。關于國內棉粕微生物脫毒所采用的微生物主要是酵母菌、乳酸菌、EM菌劑、霉菌(米曲霉、黑曲霉、甘薯曲霉、紅曲霉等)、枯草芽孢桿菌等。由于上述菌種在發酵過程中大多不能產生芽孢，存在生產的發酵菌劑活菌數不高，保藏時間不長以及發酵效果難以穩定，或者發酵菌種單一，生產工藝復雜和生產成本高等缺點。對于采用納豆芽孢桿菌、凝結芽孢桿菌、側胞芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌組成復合發酵菌劑發酵棉粕進行脫毒處理的技術，國內外未見文獻報道。

發明內容：

本發明所要解決的技術問題是：針對上述現有技術的不足，提供一種復合芽孢桿菌棉粕發酵劑及其制備方法，該發酵劑制備工藝簡單、成本和能耗低、適應性強、保藏時間長、易于批量生產、脫毒效果穩定且效果好。

為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是：一種復合芽孢桿菌棉粕發酵劑，該發酵劑中含凝結芽孢桿菌3-5×10⁸CFU/g、側胞芽孢桿菌25-35×10⁸CFU/g、納豆芽孢桿菌30-40×10⁸CFU/g、及枯草芽孢桿菌25-35×10⁸CFU/g，總菌數≥100×10⁸CFU/g。

上述復合芽孢桿菌棉粕發酵劑的制備方法，包括如下步驟：

(1)制備液體菌種：分別取枯草芽孢桿菌、側胞芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、及凝結芽孢桿菌各1株分別接種一環斜面菌種細胞于四個液體菌種培養基中，在37℃-40℃，160-200r/min條件下，搖床振蕩培養48-60h，使各種子液中的細胞芽孢形成率達90-95％，再于80℃恒溫水浴處理10-15min，得到四種液體菌種；

上述液體菌種培養基組成為每升水中加入有30-40g葡萄糖、10-15g豆餅粉、2-6g(NH₄)₂SO₄、2-4g?KH₂PO₄、1-2.5g?MgSO₄·7H₂O、3-5g?NaCl、及2-4gCaCO₃，初始pH值為7.2-7.5。

(2)發酵：將上述各液體菌種按3-6％(V/V)的接種量分別接種于相應的發酵培養基中，在培養溫度30-40℃，攪拌速度160-180r/min條件下培養48-72h；

其中：凝結芽孢桿菌的發酵培養基組成為每升水中加入有15-25g麩皮、7-10g豆餅粉、5-10g玉米漿、2-4g?KH₂PO₄、1-2.5g?MgSO₄·7H₂O、0.1-0.3gMnSO₄·H₂O、及3-5gCaCO₃，初始pH值為7.2-7.5。